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全文翻译:一键翻译整篇pdf文档
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2021-06-11 17:53:19
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怎么全文翻译?如何翻译word文档
   怎么翻译?百度搜索翻译,然后在复制word文档内容进行翻译,翻译后在将内容复制下来保持,内容多页数大的就多复制几遍。这是你全文翻译的日常吗?  可千万别,不说麻烦,如果不小心漏复制或者多粘贴内容,可直接导致翻译不准确,英文和中文的语法不同,就算你不漏字复制翻译,将全文进行分段翻译,整个文档内容的语境就会被影响。  怎么全文翻译?今天小编演示如何翻译word文档,操作简单2个步骤就可以完成,不信往下瞧。  第一步:打开【福昕翻译】的文档翻译功能,将文档完成上传。  第二步:上传文档后,可进行翻译需求和翻译语言的需求,27种语言互译,最后点【开始翻译】,进入翻译。(如下图)  完成上两步骤,系统将自动对文档进行全文翻译,之后可操作译文的查看和下载,下图为下载“高保真”译文的对比图,保留原文样式和排版,译文阅读体验非常好。  和上文的教程描述一样,两个步骤就可以翻译word,一次性全文翻译,不需要麻烦的复制粘贴翻译,翻译快速,译文查看方便,福昕翻译是一个支持多功能翻译的平台,除了文档翻译还有免费的图片翻译,一样的操作简单不同于文档,图片复制后就可以进行翻译,好用的翻译功能今天就分享到这了!
2021-06-10 19:55:44
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猫与主人关系纽带的认知与研究
经过 毛罗·伊内斯, 克莱尔·里奇-博诺特 * 和 丹尼尔·S·米尔斯 英国林肯郡林肯大学生命科学学院动物行为、认知和福利小组 LN6 7TS 学术编辑:Chiara Mariti 和 Jonathan Bowen收稿日期:2021 年 5 月 4 日/修订日期:2021 年 5 月 23 日/接受日期:2021 年 5 月 26 日/出版日期:2021 年 5 月 29 日 (本文属于特刊猫的行为、生理和福利) 简介:猫很受欢迎,但人们对它与主人的关系和纽带知之甚少。本研究以人类依恋和社会支持理论为基础,探讨猫与主人建立的不同类型的关系。一份调查问卷被用来收集关于不同情感因素的信息,这些情感因素可以支撑这段关系;猫对主人的潜在认知是一个安全的基地;主人与猫的接触程度、他们对猫的需求的敏感度以及他们与猫互动的一致性。五种不同形式的猫主人关系被确定。这些似乎构成了我们所说的“开放的关系”、“遥远的联系”、“偶然的关系”、“相互依赖”和“友谊”。这些关系在多大程度上涉及到作为社会支持或安全依附来源的对所有者的纽带。因此,我们得出结论,猫主人的债券不应该简单地或仅仅在其经典的心理意义上的依恋方面进行分析。 摘要:猫与人类形成密切的情感关系,但对此知之甚少。这项研究描述了猫可能与其主人建立的不同类型的关系。数据来自对使用与日常猫主人互动相关的社会支持和依恋表达而开发的问卷的 3994 份答复进行分析。主成分分析将项目缩减为四个因素:“主人对猫的情感投入”、“猫对他人的接受”、“猫对主人亲近的需要”和“猫的冷漠”。集群确定了三组业主,其中两组又分为两组。“开放式关系纽带”的特点是一个情感投入较轻的主人和一只回避型的猫。 “远程交往”和“随意关系”的特点是主人在情感上疏远,但猫对他人的接受程度不同。 “相互依赖”和“友谊”关系的特点是情感投入的主人,但猫对他人的接受程度不同,需要与主人保持亲近。总之,与任何复杂的社会关系一样,猫与主人之间的纽带类型是所涉及的个人之间存在的动态以及某些个性特征的产物,其中猫和主人更广泛的社交性期望可能特别重要。 关键词:感情纽带;附件;猫;人与动物的互动;所有者;关系;社会支持;气质 一、 介绍社会支持有助于福祉,并与身体和心理健康结果相关 [1]。动物可以与同种动物建立伙伴关系并从中受益,即使没有依附或以其他方式与其保持联系,也可以保持与他人的亲近 [2-4]。驯化可能使人类能够承担一种角色,从而可以为另一个物种提供社会支持 [5-7]。伴侣动物也可以为其主人提供社会支持 [8,9];即,动物的存在不仅会改善主人的日常生活,但它也可以潜在地帮助主人应对压力情况 [1],从而增加主人的适应能力 [10]。据报道,猫是一些主人的情感支持来源 [11],尤其是作为一种非判断性的红颜知己 [12,13]。人际纽带描述了个人在一起的原因;简而言之,它可以分为身体和心理纽带。如果猫没有被放出来,猫和它的主人之间就会存在身体上的联系,因为猫在身体上受到限制,不能离开主人。心理纽带表示两个人在一起的心理原因;这可能包括共同的目的,例如一起工作或有共同的兴趣(如许多工作团队发生的那样),也包括深情的情感纽带。深情纽带是从想要与另一个人联系的倾向中识别出来的,其特点是其情感内容[2]。情感纽带有多种形式;例如,受抚养人(被看护人)与其看护人之间的联系不同于看护人与其受抚养人之间的联系。前者通常以依恋行为为特征,而后者则以照顾或养育方式为特征[2]。因此,债券不一定是相互平衡的,一个人可能会利用另一个人;出现的关系将反映这一点。因此,虽然联系反映了一个人与另一个人之间相互作用的性质,但这种关系描述了由彼此之间的联系以及其他潜在因素引起的个人之间的动态。主人和伴侣动物之间的关系可能反映了一种持久的纽带,例如一种情感纽带,在这种纽带中,另一方作为一个独特的个体在情感上很重要,并且可以与其他人互换[2]。从历史的角度来看,依恋是一种情感纽带,一种强烈的情感联系,提供安全感、舒适感和参与其他活动的信心[2,14],正是在这种情况下,我们使用了“依恋”一词在本文中,根据先前试图在操作上定义猫主人关系的工作(例如,[15,16]),将其与可能表征这种关系的其他类型的情感纽带区分开来。在这种情况下,依恋的特点是希望与他人保持亲近(通常作为安全和保障的来源),以及在分离后重聚时的快乐。分离往往会导致痛苦,而持续的失去会导致悲伤[2]。在狗等物种中,有人认为狗和主人之间的纽带在很多方面很大程度上是依恋式的,这得到了狗在陌生情境测试中的行为的支持;该测试将依恋的定义用于研究目的[17]。这个结论在狗身上得到了支持,即使使用了平衡测试 [18],但在猫身上,当使用类似的测试时 [16]。因此,猫的债券可能不同,这可能反映了它们主要履行的角色。例如,伴侣动物也可能在依恋关系中扮演安全和保障提供者的互惠角色[19],尽管主人通常被称为照顾者。它们还可以在遇险时为主人提供安慰 [20],它们可能是快乐和安慰的源泉[21-23],而在缺席时它们可能会被错过 [22]。这些反映了情绪的多样性,因此在描述联系和相关关系时,在强调依恋的重要性时需要谨慎。考虑到合作伙伴在不同时间(例如,玩伴、照顾者等)所承担的社会角色的全部范围以及这可能提供的支持类型,需要认识到将个人保持在一起的深情纽带的情感复杂性。 自我报告问卷的使用是依恋和关系研究的常见做法[19]。有几种尺度可以衡量宠物与主人关系的质量 [24-30],但许多尺度对特定物种的特征并不敏感。然而,Howell 等人。 [30] 改编了蒙纳士狗-主人关系量表(MONASH)[29] 开发了猫 - 主人关系量表(CORS)来评估猫 - 主人关系的质量;考虑到它在狗文学中的最终基础,这个量表可能对主人-猫关系的复杂性提供有限的洞察力。猫是潜在的社会动物,能够形成稳定的合作种内群体,但也能形成种间关系与人类和其他家养物种[31]。在澳大利亚、英国和美国,大约四分之一到三分之一的家庭至少拥有一只猫 [32-34]。然而,由于行为问题和主人情况的变化,每年有大量猫被放弃 [33,35],这是放弃的两个主要原因 [35]。大约 77% 的主人报告说他们的猫至少有一种不受欢迎的行为;其中很大一部分与慢性压力和资源不足有关[34],表明主人对猫的行为和需求的期望通常很差。据报道,大约三分之一到一半的兽医对肥胖、获得兽医护理、慢性压力以及为他们的猫科动物患者提供的资源不足表示担忧 [34]。因此,更好地了解猫与主人之间存在的关系的性质可以帮助我们更好地照顾猫,改善猫与主人之间的关系,并更深入地了解养猫的潜在好处和局限性[19]。本研究的总体目标是通过使用依恋和社会支持理论作为支撑它们的情感纽带的理论基础,识别和描述主人对猫与它们建立的不同类型关系的看法 [14,19]。首先,我们需要开发一个可靠的工具(问卷调查)来探索可以产生从属关系的社会支持、亲情纽带和依恋(包括依恋风格)的特征。其次,我们检查了工具中的不同项目如何相互关联以形成主要成分,这些成分可以通过参考特定的潜在心理结构来解释。最后,我们可以使用与不同组成部分相关的分数来定义不同形式的猫主人关系,并评估它们与人口特征的可能关联,以了解支撑情感纽带的潜在性质。2. 材料和方法该研究得到了林肯大学研究伦理委员会的授权(参考:CoS 2020-1069)。 2.1. 问卷制作使用在线调查软件 QualtricsXM(补充表 S1)准备和分发四部分问卷。第一部分包括与主人人口信息相关的五个项目(年龄、性别、家庭人数、原籍国和居住国),第二部分也有五个项目,涉及猫的人口统计信息(年龄、性别、来源、拥有的猫的数量,可以进入户外)。主人被告知,如果他们有不止一只猫,那么他们应该回答关于名字在字母表中排在第一位的猫的调查。第三部分由总共 93 个李克特矩阵量表项目组成,根据它们对猫主人关系的理论应用生成,有 8 个量表点(从非常不同意到非常同意,包括一个不适用的选项)。这部分细分为以下三个小节: l 主人的照料风格——第一小节中的 38 个项目反映了主人的行为和态度,这些行为和态度与他们与猫的接触程度、他们对猫需求的敏感性以及他们与猫互动的一致性(改编自相关的人类文献)先驱 Bowlby [36]和Ainsworth[2,37]。l 猫与其主人关系的情感基础——第二小节,包含 25 个项目,旨在确定主人可能会被猫的情绪感知的不同方式(即,不同形式的情绪刺激 [38,39])。l 传统的附件特征——第三小节中的 30 个项目探索了各种猫与主人互动的各个方面,包括主人提供社会支持的能力、猫与主人之间关系的独特性以及猫将主人视为安全基地的看法 [2,5,37,40,41] . 在最后一部分,参与者被问及他们是否愿意参加另一项调查。完成整个调查大约需要 15 分钟。该问卷最初以英文设计,由作者之一 (MI) 翻译成葡萄牙语。两位母语为葡萄牙语的人被要求将问卷翻译回英语。他们的版本与另一位作者 (DM) 的原作进行了比较,以建立语言的一致性。为了便于理解,问卷以每种语言发送给 12 位猫主人,他们是与我们的目标人群一致的非科学猫主人;只进行了微小的修正以产生最终版本。 2.2. 数据采集该调查于 2020年7 月 19 日至2020 年9 月 7日通过社交媒体,包括个人和群组(经许可)Facebook 网站进行宣传。社交媒体允许使用滚雪球抽样方法招募大量人口;即,在初始主题组中,每个主题将依次引用新主题,依此类推 [42]。这种方法允许扩展到可能与原始来源密切相关的直接接触者之外[43]。然而,这种方法确实限制了研究人员对受试者选择的控制,引入了可能的偏见,以至于细节只能到达相互关联的个体,可能排除了一部分人群[44]。然而,在目前的情况下,这些都不是重要的问题,因为我们并不试图描述我们发现的真实流行情况。该研究的纳入标准是参与者年满 18 岁,并且他们仅完成了目前与他们一起生活了至少六个月的一只猫的问卷。他们可以选择用英语或葡萄牙语进行调查。2.3. 数据分析使用SPSS(v25,IBM)分析数据。2.3.1. 项目可靠性评估为了评估项目的可靠性,问卷在第一次回复后大约一个月通过电子邮件再次发送给同意参加第二次调查的受访者。获得的答复与对问卷的相应第一答复配对。由于我们随后的分析集中在问卷第三部分的回答模式和之间的关系,因此通过第一次和第二次调查之间这些项目的相关性和显着差异的评估来评估可靠性。保留项目需要 Pearson 相关系数大于 0.7 且显着(p < 0.01)。项目也不能有显着差异,因此如果满足第一个要求的项目在两次调查之间的价值显着不同(Wilcoxon 配对测试),则会被拒绝。只有满足这两个要求的项目才会保留在下一阶段的分析中,因为这表明相关性与以0为中心的截距没有显着偏移。 2.3.2.可靠项的潜在结构为了调查问卷中不同项目之间的相互关系,对问卷第三部分的可靠项目使用了主成分分析 (PCA)。倾斜旋转(直接倾斜)用于提取,因为假设不同的项目可能是相关的[45]。模式矩阵用于确定 PCA 中不同因素的权重 [45]。要提取的主成分 (PC) 的数量是根据碎石图上的拐点结合 Kaiser 标准确定的。对于主成分的解释,仅考虑系数大于 0.4 的项目。 2.3.3. 人口结构生成每个受访者的主成分分数。然后使用层次聚类分析(使用 Ward 方法和平方欧几里得距离)来描述受试者之间的关系。然后评估得到的树状图的可行集群(群体)。 2.3.4. 群体特征根据每个 PC 的中值分数对组进行表征。使用 Kruskal-Wallis检验检测到组之间的显着差异(因为每个集群中不同PC 的分数的标准化残差不是正态分布的)。还使用 Kruskal-Wallis测试评估了未在任何 PC 上加载的项目分数的显着差异。 通过 Kruskal-Wallis 检验(主人和猫的年龄)或卡方检验(用于回答问卷的语言、猫和主人的性别、家庭规模、主人所在的国家/地区)评估与人口统计相关的集群之间可能存在的显着差异。来源和居住地、猫的来源、拥有的猫的数量和户外活动)。当使用 Kruskal-Wallis 检验时,用于成对比较的事后检验用于确定哪些组之间存在显着差异。当使用卡方检验时,标准化残差确定了在特定群体中或多或少普遍存在的人口统计学特征。 当 p< 0.05调整后,结果被认为是显着的,使用 Bonferroni当对相关变量进行多次测试时应用校正。 3. 结果问卷共有6965份回复。在删除了不适当的主人或猫年龄条目(例如,给出了多个年龄条目)的响应后,剩下 6357 个(数据集A)。 大多数受访者为女性 (91.7%),她们在英国生活 (71.1%) 和长大(68.1%)的两人家庭 (44.8%)。大多数猫都已绝育(94%),有某种形式的户外活动(70.5%),要么自己生活(40.9%),要么与另一只猫(32.4%)共用房子(补充表S2)。 3.1. 项目可靠性评估第二次共向237名受访者发送问卷,收到75份回复。为了比较完整的答案集,从数据集中删除了至少有一个空白答案的所有答案。这产生了56 个配对的响应集。问卷第三部分共 93项,保留 26项(第一部分38 项中的 9项,第二部分 25项中的 6项,第三部分 30 项中的 11项)用于进一步分析(补充表 S3 和 S4)。 3.2. 可靠项的潜在结构在数据集 A 中的 6357 个回答中,排除了对剩余 26 个项目中的一个或多个没有回答的任何回答。总共剩下 3994 个(数据集 B)。数据集 B(表 1)经过目视检查并被认为与数据集 A 相似,因此用于 PCA。提取了 4 个 PC,占总方差的 39.4%。有 22 个项目在 PC 上的加载系数大于 0.4,4 个项目在任何 PC 上都没有加载(表 2 和补充表 S5)。未完待续……点击查看:更多生物学分类文章使用文档翻译功能 免责声明:福昕翻译只充当翻译功能,此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的,仅代表作者个人观点,与本网站无关,版权归原始网站所有。仅供读者参考,并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等,请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于:MDPI
2021-06-08 19:03:42
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怎么全文翻译pdf?
这不马上又到端午假期了,老板提前给我一堆pdf文档,语种五花八门分别有英文的、日文的、德文的……,生怕我在假期前完成不了任务,还好小编拥有“文霸”神器一开文档秒翻,pdf文档全文变成中文,接下来上场的是—怎么全文翻译pdf?免费翻译神器—福昕翻译,支持文字翻译、图片翻译、文档翻译、专业翻译等服务。翻译pdf选择【文档翻译】功能,然后上传需要改变“身份”的pdf文档。文档上传后页面如下图,选择需要翻译的语种,27种语言可挑选,最后点击【开始翻译】,选择20多页的一份文档,消耗额度显示免费。一口茶不到的功夫,文档翻译好了,点击【查看】(原来删除按钮的位置)就可以在线查看译文了,有需要的下载的也可以下载,为了适应阅读译文有好几种模式,下图为在线查看(逐页对比)截图。 ps:逐页对比,左侧是原文、右侧是译文,查看译文时鼠标滑到哪原文也会自动跳到对应的内容,很适合阅读。翻译过程很简单,上传文档、选择翻译语言、最后点击开始翻译就完成了,但是福昕翻译其实有很多比较好用的功能,写太细字很多,其余功能等待你们去发掘吧,怎么全文翻译pdf?福昕文档翻译功能一键快速翻译。
2021-06-08 17:08:17
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 怎么全文翻译,将文档翻译成日语?
 大家有翻译的需求吗?每天翻译的时间会占多少呢?我们的生活中已经不缺乏外语的踪迹了,比较多的是英语,常用的包括日语韩语等等来自各国语言,不多的人拥有良好的外语水平,更少的人能够同时掌握多国语言,在遇上外语言资料以及书籍时怎么办?怎么全文翻译,将文档翻译成日语?  使用文档翻译功能,全文翻译非常简单今天使用的是福昕翻译的【文档翻译】功能,将整份文档上传,等待全文翻译。按需求翻译,文档上传后可以选择翻译的语言和需求,然后点击【开始翻译】按钮,一键操作,全文快速翻译。小编是选择免费文档翻译,将原文英文内容翻译成日语,翻译速度挺快的,几十秒就将一份二十多页的文档翻译成功了,下图是在线预览的截图,使用左右逐页对比,还可以操作下载保留原文样式排版的译文。如果运用常规的文字文段翻译,将文档内容一段段复制下来在使用【文字翻译】翻译后在复制回去,这样操作麻烦非常费时间,多次复制粘贴容易出错,而且短句翻译会影响整篇文档的准确度,文档翻译为全文翻译为生,一次性翻译整份文档,方便、快捷,福昕翻译文档翻译功能还可以免费使用,从此再也不怕文档翻译。
2021-06-02 19:30:44
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全文翻译丨高效办公丨免费翻译PDF
作为一个职场人员,高效办公应该是我们办事第一准则,毕竟可以使用互联网工具处理的事情如果还在使用人工处理,那你就比别人“慢”了,多了不必要的费时费力,少了思考的时间,慢了升职的机会。比如,别人花费几分钟时间使用福昕翻译翻译了几十页的文档,而你苦于“亲力亲为”翻译一两个小时都还没有完成,还得考虑译文的准确度。今天小编代领大家使用高效全文翻译。步骤一:使用福昕翻译,选择【文档翻译】功能,将文件上传翻译。步骤二:选择翻译需求,根据自己的要求按需翻译,注意看下翻译的语言有没选对,最后点击【开始翻译】按钮,坐等翻译完成。步骤三:查看译文,翻译很快,立马就可以查看了,在线查看译文目前2个模式:逐页对比、上线双语,译文下载也是两个模式,下图为保留原文格式的“高保真”译文,下面放置了每个模式的对比图以及保留原文样式的“高保真”译文对比。 文档翻译的步骤非常简单,上传文档后,点击开始翻译,立马进入翻译,27种语言互译常用文档格式都可以进行翻译,如果不慎关闭网页也没关系,再次打开登录账号,右上角【我的翻译】将查看历史记录中所有的翻译订单,然后已翻译的文档可以进行重复“查看”和“下载”译文,高效的全文翻译技巧就交给你啦!
2021-05-28 19:12:58
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怎么操作文档翻译?免费全文翻译
大家使用过“文档翻译”功能吗?不是指复制内容然后使用文段翻译功能,而是整份文档上传一次性翻译还免费的那种!看到这是不是觉得,上传文档就可以整篇翻译这么省事的文档翻译居然还免费?是的,今天小编给大家分享当需要翻译文档时,怎么操作文档翻译?第一步骤:打开福昕翻译官网,选择【文档翻译】功能。第二步骤:上传文档后页面如下图,这时选择翻译需求以及翻译语言,目前支持27种语言免费互译,系统自动识别原文语言只要确认下译文语言就可以了,默认是中文,最后点击【开始翻译】。 第三步骤:自动翻译快速查看译文,如果不小心关闭网页也没关系,重新打开网页在右上角【我的翻译】可以查看历史文档翻译订单,可对译文操作“查看”“下载”。下图为在线双语查看译文,还有好几种模式可切换。文档上传后,一键就可以翻译整篇文档,全文快速免费翻译,省了很多事情,目前支持pdf、word、PPT、Excel格式翻译,全国27种语言互译,福昕翻译除了文档翻译还有免费好用的图片文字翻译以及专业的人工议员翻译,常用的翻译需求都可以得到解决。
2021-05-27 15:05:45
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基于细胞的髓磷脂再生方法
直接重编程少突胶质细胞前体中的周细胞,作为基于细胞的治疗策略的潜在基础2021年4月12日   髓磷脂对于在大脑中正确,快速地传输电信号非常重要。这种包裹轴突的富含脂质的膜在某些退行性神经疾病中受损。其中大多数是罕见的遗传性疾病,具有严重的临床病程。从体细胞成纤维细胞诱导的少突胶质祖细胞(iOPCs)的生成可能提供针对髓磷脂疾病的基于细胞的治疗策略。但是,iOPC的生成效率很低,并且生成的iOPC表现出有限的扩展和分化能力。一个国际研究人员团队现已克服了这些限制。这项研究提出了一种基于细胞的方法来研究针对髓磷脂疾病的治疗潜力。  体外培养中的成熟少突胶质细胞(红色)。这些细胞与诱导的少突胶质祖细胞(iOPC)分化,后者又由周细胞产生(蓝色:细胞核)。 ©MPI分子生物医学  神经细胞通过其过程(轴突)将其信号传递给其他神经细胞。缠绕在轴突周围的绝缘护套极大地提高了电脉冲的速度。这种快速的电活动对于处理大脑中的信号并通过周围神经束将其传输到身体非常重要。绝缘鞘由称为髓磷脂的富含脂质的膜组成,并由所谓的少突胶质细胞形成。如果髓鞘被破坏(如脱髓鞘疾病一样),则会失去导电性。临床后果是严重且不可逆的。  全球科学家正在探索各种基于细胞的策略来再生髓鞘。一种明显的方法是移植少突胶质细胞以使轴突重新髓鞘化。但是,移植的成熟少突胶质细胞不能做到这一点。仅当移植未分化的少突胶质细胞前体细胞(OPC)时,才能形成新的髓磷脂。  多亏了所谓的iPS技术,才有可能将一种类型的细胞转化为其他细胞类型。科学家最初能够将小鼠和大鼠的胚胎皮肤细胞重编程为诱导性多能干(iPS)细胞,并将其成熟为少突胶质细胞前体细胞(OPC),称为诱导性OPC(iOPC)。但是重编程过程效率低下,并且所得细胞无法增殖和分化,无法在临床实践中使用。周细胞充当起始细胞类型  来自10个实验室的国际研究人员团队由德国明斯特的马克斯·普朗克分子生物医学研究所的HansSchöler和现在的韩国天主教大学医学院副教授Kee-Pyo Kim领导。现在成功克服了这些障碍。研究人员使用皮肤细胞作为起始细胞类型,而不是皮肤细胞。周细胞覆盖毛细血管内皮细胞,并形成血脑屏障的组成部分。  该研究的第一作者Kee-Pyo Kim说:“周细胞和少突胶质细胞祖细胞在发育过程中起源于相同的细胞群。” “因此,我们认为周细胞非常适合这种重编程以及随后分化为少突胶质细胞祖细胞,” Kim继续说道。Kim解释说:“如果转换过程更直接,更简单,它将更有效率,因此对以后的细胞疗法更加有趣。” “这是因为起始细胞具有其原始身份的记忆,”金说。记忆由所谓的转录组(在给定时间存在于细胞中的所有RNA分子)和表观遗传标记(调节基因活性的DNA的翻译后修饰)组成。”  确实,研究人员能够将周细胞转变为少突胶质细胞祖细胞。“我们的源自周细胞的iOPC可以有效地繁殖并分化为有髓的少突胶质细胞,” Kim说。“从皮肤细胞产生iOPC的过程中可以看出,我们不需要三个转录因子,但是只有两个因子:Olig2和Sox10的过表达足以诱导iOPC的产生,” Kim说。 移植到大脑  预先分化的前少突胶质细胞(绿色,红色:来自iOPC的细胞,蓝色:细胞核)移植后的体内髓鞘形成。 ©MPI分子生物医学  为了研究这些iOPC是否以及如何在体内(即在大脑本身)成熟为产生髓磷脂的少突胶质细胞,研究人员将iOPC移植到了颤抖小鼠的大脑中。这些小鼠在MBP基因中具有所谓的颤抖突变。突变会导致髓鞘碱性蛋白(MBP)产生,而髓鞘碱性蛋白(MBP)对于髓鞘是必不可少的。因此,颤抖的小鼠在出生后几周内会出现特征性的“颤抖”步态,通常被用作白细胞营养障碍的动物模型。已经证明,周细胞衍生的iOPC移植到颤抖小鼠的脊髓或大脑中,可诱导轴突的髓鞘形成。这些关键实验是在美国罗切斯特大学的史蒂夫·高德曼(Steve Goldman)的实验室中进行的,他在2008年开发了该模型。  “令我们惊讶的是,在移植到无法使轴突脱皮的颤抖小鼠的大脑中后,大多数iOPC沉淀在血管上,并变成了周细胞。它们没有分化为少突胶质细胞,这种少突胶质细胞通常包裹着带有髓鞘的轴突。”金说:“这向我们表明,iOPC保留了其原始表型的记忆,从而阻止了它们在体内的髓鞘形成。”  因此,iOPC不会自动变成产生髓磷脂的少突胶质细胞。他们需要额外的努力。因此,研究人员进一步在体外将iOPCs分化为少突胶质前细胞。这些细胞在体内和体外都会产生产生髓磷脂的少突胶质细胞。  当iOPCs预分化为少突胶质前体细胞,然后移植到颤抖小鼠的大脑中时,可能会产生强力的髓鞘形成。“在体内髓鞘形成特别明显移植12周后,我们很少发现已经恢复到周细胞的细胞,”金说。“与主要的OPC(天然的组织来源的OPC)相比,我们发现髓鞘形成能力没有差异,” Kim说,证实了阳性结果。金总结说:“通过这项研究,我们已经建立了一种有效的策略来产生高度可扩展和功能化的iOPC群体。” “这种方法克服了阻碍其治疗应用的重要局限性,”金说。即,随后的治疗方法需要许多细胞。因此,可扩展的初始细胞群是必不可少的。汉斯·舍勒说:“我们的研究清楚地表明,在开发基于细胞的治疗方法时,必须记住供体细胞的记忆。” “为了开发直接转化细胞的治疗潜力,需要进一步研究不同的重编程方法如何影响供体细胞的记忆,以及是否有可能例如通过化学试剂引导和稳定细胞朝向期望的细胞类型的身份。”点击查看:更多有关生物学文章 使用专业生物学翻译 使用文档翻译功能免责声明:福昕翻译只充当翻译功能,此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的,仅代表作者个人观点,与本网站无关,版权归原始网站所有。仅供读者参考,并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等,请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于:mpg
2021-04-20 20:04:56
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PDF文档怎么翻译?学会这个教程一步秒翻
PDF全称(Portable Document Format)其意思为“便携式文档格式”,PDF文档是日常使用中最常用的文档格式了,因为它可以很好的保存文档格式,不会出现段落错乱、文字乱码这些排版问题,也正是这个特性导致内容翻译时让很多人头疼不已,但在这个5G时代里,没有什么问题是不能使用互联网解决的,学会这个教程一步秒翻PDF文档。使用 福昕翻译 作为教程工具,第一步打开官网点击【文档翻译】功能,并点击“免费上传”按钮将PDF文档上传。接下来确认一下上传文档的信息:文件名、翻译的语种、翻译需求,无误后点击“开始翻译”,系统将进行快速翻译,立马就可以得到译文了。译文操作:在翻译成功后,图2的文件信息【删除】按钮将会变为【阅读】按钮,点击阅读就可以在线阅读译文(下图为双语译文形式),还可以操作下载译文。整个操作过程很简单,两个步骤:上传文档、点击开始翻译,立马就可以看到译文,而且还可以根据自己的翻译需求来操作,打开https://fanyi.pdf365.cn/ 体验高效文档翻译。
2021-03-12 20:04:15
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基于CRISPR的基因疗法可减轻小鼠疼痛
CRISPR-based gene therapy dampens pain in mice基于CRISPR的基因疗法可减轻小鼠疼痛Targeted approach could lead to an opioid-free way of treating chronic pain.有针对性的方法可能会导致无阿片类药物治疗慢性疼痛。Ariana Remmel阿丽亚娜·雷梅尔(Ariana Remmel) Pain signals are transmitted to the brain through neurons similar to these in the spinal cord.Credit: Jose Calvo/Science Photo Library疼痛信号通过类似于脊髓中的神经元传递到大脑。图片来源:Jose Calvo /科学图片库A gene-silencing technique based on CRISPR can relieve pain in mice, according to a study1. Although the therapy is still a long way from being used in humans, scientists say it is a promising approach for squelching chronic pain that lasts for months or years. Chronic pain is typically treated with opioids such as morphine, which can lead to addiction.一项研究表明,基于CRISPR的基因沉默技术可以减轻小鼠的疼痛。尽管该疗法距离人类使用还有很长的路要走,但科学家们说,这是消除持续数月或数年的慢性疼痛的一种有前途的方法。慢性疼痛通常用阿片类药物(如吗啡)治疗,这可能会导致成瘾。 “It’s a real challenge that the best drugs we have to treat pain give us another disease,” says Margarita Calvo, a pain physician at the Pontifical Catholic University of Chile, in Santiago, who wasn’t involved in the research. That’s why the CRISPR-based technique is exciting, she says.圣地亚哥的智利天主教大学的止痛医生玛格丽塔·卡尔沃(Margarita Calvo)表示:“这是一个真正的挑战,我们必须使用最佳的药物来治疗疼痛,这会给我们带来另一种疾病。”她说,这就是基于CRISPR的技术令人兴奋的原因。Scientists are already evaluating CRISPR therapies that edit a person’s genome as treatments for blood diseases and some forms of hereditary blindness. The new version of CRISPR doesn’t edit genes directly — it stops them from being expressed — and so shouldn’t cause permanent changes, although it’s unclear how long its effects last for.科学家已经在评估可编辑人基因组的CRISPR疗法,以治疗血液疾病和某些形式的遗传性失明。新版本的CRISPR不能直接编辑基因-它阻止了基因的表达-因此不应造成永久性改变,尽管目前尚不清楚其作用能持续多长时间。 A new way to target pain针对疼痛的新方法Some studies estimate that a large proportion of the population in Europe and the United States — as high as 50% — experiences chronic pain2,3. This pain can become debilitating over time by limiting a person’s activity and having a negative effect on their mental health. Despite the prevalence of the condition, few options exist for providing long-term relief without side effects. Even so, doctors have been moving away from prescribing opioids owing to addiction risk, and that has pared down their options even further.一些研究估计,欧洲和美国的大部分人口(高达50%)都患有慢性疼痛2,3。随着时间的流逝,这种疼痛可能会因限制人的活动并对其心理健康产生负面影响而变得虚弱。尽管该病很普遍,但提供长期缓解而又没有副作用的选择很少。即便如此,由于成瘾的风险,医生已经不再开处方阿片类药物,这进一步削减了他们的选择范围。This plight inspired bioengineer Ana Moreno and colleagues at the University of California, San Diego, to seek an alternative treatment.这种困境激发了加利福尼亚大学圣地亚哥分校的生物工程师Ana Moreno及其同事的灵感,寻求替代疗法。Pain registers with the brain when a stimulus — such as touching a scalding hot pan or being poked with a sharp object — triggers neurons to send an electrical signal through the nerves in the spinal cord and upwards to the brain. This happens when pore-like openings along the neuron — called ion channels — open and close to allow ions to pass through, which transmits a current along the nerve. With chronic pain, parts of this pathway can become hyperactive.当刺激(例如触摸烫伤的锅或用锋利的物体戳戳)刺激大脑触发神经元,使其通过脊髓中的神经向大脑发送电信号时,疼痛就会在大脑中出现。当沿着神经元的毛孔状开口(称为离子通道)打开和关闭以允许离子通过时,就会发生这种情况,离子沿着神经传递电流。如果患有慢性疼痛,该途径的某些部分可能会变得过度活跃。Although there are many types of ion channel, studies have suggested that a sodium channel called Nav1.7 could play a central part in chronic pain. When尽管离子通道的类型很多,但研究表明,一个名为Nav1.7的钠通道可能在慢性疼痛中起着中心作用。什么时候people have mutations in the gene coding for this channel, they either experience extreme, constant pain, or can’t feel any pain at all.人们在编码该通道的基因中发生了突变,他们要么经历着持续不断的痛苦,要么根本没有任何痛苦。So Moreno and her team thought they might be able to stop pain signals travelling to the brain by preventing neurons from producing Nav1.7. Chemists have been trying to block Nav1.7 with small-molecule drugs and antibodies, but have struggled because these therapies also interact with structurally similar sodium channels in the body, causing side effects including numbness and poor coordination. But with CRISPR, which targets genes with precision, the researchers thought they might be able to hit Nav1.7 directly, without any off-target effects.因此,莫雷诺和她的团队认为,通过阻止神经元产生Nav1.7,他们也许能够阻止疼痛信号传播到大脑。化学家一直在试图用小分子药物和抗体来阻断Nav1.7,但由于这些疗法还与体内结构相似的钠通道相互作用而产生了苦恼,导致副作用,包括麻木和协调性差。但是,利用精确定位基因的CRISPR,研究人员认为它们可能能够直接击中Nav1.7,而不会产生脱靶效应。 Harnessing CRISPR’s precision利用CRISPR的精度The team started with a modified version of the Cas9 protein that’s normally part of the CRISPR gene-editing system. It could target, but not cut, the DNA sequence encoding Nav1.7. The researchers attached to the modified Cas9 a second, ‘repressor’ protein that stops the Nav1.7 gene from being expressed. The researchers packaged this system in a small, inactive virus called an adeno-associated virus that could shuttle it into cells.研究小组从Cas9蛋白的改良版开始,该蛋白通常是CRISPR基因编辑系统的一部分。它可以靶向但不能切割编码Nav1.7的DNA序列。研究人员在修饰的Cas9上附加了第二个“阻遏”蛋白,从而阻止了Nav1.7基因的表达。研究人员将该系统包装在一种称为腺相关病毒的小型无活性病毒中,该病毒可以将其穿梭到细胞中。They gave mice a spinal injection of the gene-silencing therapy, then tried to induce chronic pain by injecting the animals with chemotherapy drugs or inflammatory agents. These mice were more tolerant of painful stimuli. And mice that were already suffering from chronic pain benefited from the therapy, the team showed. For instance, mice that received doses of chemotherapy became very sensitive to pain, but lost that sensitivity after a single injection of the gene therapy. The results were published in Science Translational Medicine on 10 March1.他们给小鼠进行了基因沉默疗法的脊髓注射,然后试图通过给动物注射化学疗法药物或炎症剂来诱发慢性疼痛。这些小鼠对疼痛刺激更宽容。研究小组表明,已经患有慢性疼痛的小鼠也从这种疗法中受益。例如,接受化学疗法剂量的小鼠对疼痛变得非常敏感,但是在单次注射基因治疗后就失去了这种敏感性。研究结果于1月10日发表在《科学转化医学》上。 The pain relief seemed to last, in some cases, for as long as 44 weeks after the injection. “That’s quite remarkable,” says Sulayman Dib-Hajj, a neuroscientist at Yale University in New Haven, Connecticut.在某些情况下,注射后疼痛缓解可能持续长达44周。 “这非常了不起,”康涅狄格州纽黑文市耶鲁大学的神经科学家Sulayman Dib-Hajj说。Importantly, says Calvo, the treatment seems to have knocked down expression of Nav1.7 without shutting down other sodium channels — the mice didn’t lose any sensations apart from pain, and displayed no other side effects.卡尔沃说,重要的是,这种疗法似乎在不关闭其他钠通道的情况下敲低了Nav1.7的表达-小鼠除疼痛外没有失去任何感觉,也没有表现出其他副作用。Despite their excitement, scientists caution that these results are still preliminary, and they don’t know whether the pain relief observed in mice will translate to humans. “It gives us hope that gene-therapy approaches may work in humans” for treating chronic pain, says Dib-Hajj, “but more work needs to be done.”尽管很兴奋,科学家们警告说,这些结果仍是初步的,他们不知道在小鼠中观察到的疼痛缓解是否会转化为人类。 Dib-Hajj说:“它给我们希望基因治疗方法可能对人类有用”,以治疗慢性疼痛,“但还需要做更多的工作。”Moreno is now chief executive of Navega Therapeutics in San Diego, which plans to continue developing the treatment with the hope of one day trialling it in humans.莫雷诺现在是圣地亚哥Navega Therapeutics的首席执行官,该公司计划继续开发这种疗法,希望有一天能在人体中进行试验。 点击查看:更多有关生物学文章更多医学分类文章更多双译译文文章使用双语译文翻译功能 免责声明:福昕翻译只充当翻译功能,此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的,仅代表作者个人观点,与本网站无关,版权归原始网站所有。仅供读者参考,并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等,请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于:nature
2021-03-16 17:33:01
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在活细胞中研究RNA与蛋白质相互作用的动力学
了解生物分子在细胞中结合和解离的速度对于建立生物学定量模型至关重要,但是直到现在,才可以使用体外纯化的蛋白质来测量这些动力学。正如遗传学家Theodosius Dobzhansky在1973年指出1时,“除了进化,生物学上没有任何意义。” 许多现代生物学家可能会补充说,除了从生物化学的角度来看,分子生物学没有任何意义-如果没有生物化学提供的定量理解,生物学家如何预测生物体早期发育过程中蛋白质水平降低两倍的影响,还是癌细胞中另一种蛋白质的浓度增加了十倍?长期以来,简化的生物化学实验与混乱的细胞之间的鸿沟似乎无法克服。现在,Sharma等人在《自然》杂志上撰文。2个 报告了一种能够对细胞中的分子相互作用进行生化分析的技术。作者专注于RNA分子与蛋白质之间相互作用的动力学。信使RNA分子与各种RNA结合蛋白(RBP)结合,这些蛋白控制着mRNA生命周期的几乎每个方面-从最初加工的RNA到最终的破坏3。每个RBP可以结合数百个RNA分子,每个RNA可以被数十种不同的RBP 4结合。此外,RNA-蛋白质相互作用不是静态的5,6。取而代之的是,蛋白质可以快速结合至其靶RNA,并与它们迅速解离(图1),而这些动力学是基因调控的核心。换句话说,RNA-蛋白质相互作用的动力学是基因表达的驱动力。因此,定义细胞中这些动力学的参数对于充分理解基因表达的调控至关重要。 图1 | 一种探测细胞中RNA与蛋白质相互作用的方法。作用于RNA分子的蛋白质会迅速与其靶结合位点缔合和解离。为了定量地了解基因调控,需要测量缔合和解离的速率,但是在活细胞中不可能做到。Sharma等。图2描述了一种称为KIN-CLIP的方法,该方法使用紫外线的超快脉冲在细胞中的结合蛋白与RNA分子之间产生共价交联。这不仅可以鉴定蛋白质的RNA靶标(如先前报道的交联技术中可能的那样),而且由于交联过程的快速性,还可以确定缔合和解离的动力学。尽管已经研究了RNA与蛋白质的相互作用数十年,但尚未对其在细胞中的动力学进行表征。广义上讲,动力学见解只能从使用纯化蛋白的体外研究中获得。在细胞中的实验已经能够识别RBP的RNA目标,但缺乏测量相互作用动力学的精度5。随着高通量测序方法的出现,体外方法现在可以探测蛋白质与成千上万个RNA变体7相互作用的动力学。但是这些实验仍然在没有细胞环境的情况下对纯化的蛋白质进行。在过去的几年中,一种称为交联和免疫沉淀的方法8(CLIP)已成为表征细胞中RNA与蛋白质相互作用的主要工具。在CLIP中,使用紫外线将与RNA分子复合的蛋白质共价交联到RNA上。然后分离复合物,并通过高通量测序鉴定交联的RNA。这种方法提供了在复杂细胞环境中与特定RBP结合的RNA的目录,但充其量只能提供这些相互作用的快照。Sharma和他的同事现在弥合了体外之间的鸿沟通过开发一种可以确定细胞中RNA与蛋白质相互作用的动力学参数的CLIP的策略和CLIP。作者的主要见解是,先前报道的CLIP方法的某些技术方面使此类方法无法用于捕获动力学参数。最具挑战性的限制是,交联速率必须快速以捕获蛋白质和RNA分子缔合和解离的速率。常规的UV源无法实现足够快速的交联,因此使用它们来测量动力学就像使用慢速快门拍摄奔腾的骏马-图像中的所有东西都模糊在一起。这一认识促使作者使用脉冲飞秒紫外线激光器,该激光器将蛋白质交联到RNA的速度足够快,可以捕获动力学参数。为了测试该方法,作者将其应用于名为Dazl的RBP,这是生产生殖细胞所必需的,并调节基因表达9。Dazl结合数百个目标mRNA,增加其稳定性和产生的蛋白质数量10。然而,尽管其具有生物学重要性,但关于Dazl的结合和功能的许多知识仍未知,这使其成为KIN-CLIP实验的理想候选者。Sharma和同事首先验证了KIN-CLIP可以识别从“快照” CLIP生成的先前发布的数据集中发现的RNA靶标。然后,他们计算了Dazl与RNA中数千个结合位点的缔合和解离的动力学参数,称为速率常数。这些结果表明,Dazl结合是高度动态的:其结合时间短;RBP仅驻留在各个站点几秒钟。Dazl也很少结合,因此在大多数情况下,结合位点都不含蛋白质。作者还发现,多个Dazl分子倾向于在彼此靠近的位点结合。动力学分析表明,这可能是由于合作结合引起的,这种现象是一种蛋白质与一个位点的结合增加了其他蛋白质与附近位点结合的可能性。最后,作者将新确定的Dazl动力学参数纳入了其对基因表达影响的预测模型中,从而为Dazl的功能提供了生化基础,并为将来的研究奠定了基础。这项研究最令人兴奋的方面之一是KIN-CLIP在研究其他RBP方面的潜力,但是该方法确实有一些局限性。例如,与所有基于CLIP的技术一样,将目标蛋白质与结合的RNA交联的能力是必需的。这可能具有挑战性,因为某些蛋白质没有正确定向的必要侧链以进行交联。但是,对于潜在的KIN-CLIP转换而言,最大的障碍是交联需要专用设备:对于许多生物学家而言,脉冲飞秒激光可能并不容易获得。此外,KIN-CLIP库的实验过程和相关分析比标准CLIP实验的过程更复杂,并且可能被证明是采用该过程的另一个障碍。尽管如此,这项研究将生物化学的工具带入了活细胞,并且在此过程中可能为研究RNA与蛋白质的相互作用提供了一个转折点。下一步是将KIN-CLIP应用于其他RBP,但将其应用到其他类型的相互作用生物分子上的前景也已浮出水面。的确,作者们有趣地注意到,脉冲飞秒激光可以使蛋白质与DNA交联-也许“ DNA KIN-CLIP”就可以实现。Sharma及其同事不仅为RNA生物学设定了新标准,还可能更广泛地释放了生物化学对分子生物学的影响。 点击:查看更多生物学文章 查看更多医学文章 使用免费全文翻译功能 免责声明:福昕翻译只充当翻译功能,此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的,仅代表作者个人观点,与本网站无关,版权归原始网站所有。仅供读者参考,并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等,请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于:nature
2021-03-04 19:04:08
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冠状病毒,呼吸道合胞病毒和A型流感病毒的广谱抑制剂
Thapsigargin是主要人类呼吸道病毒的广谱抑制剂:冠状病毒,呼吸道合胞病毒和A型流感病毒点击:查看上部分内容介绍图1. thapsigargin(TG)在无细胞毒性水平下短时间(30分钟)暴露于人细胞,迅速引起延长的(≥48h)抗病毒状态,从而阻止了RSV复制。 TG在(A)感染前24小时或(B)感染后24小时以剂量依赖性方式引发,可阻止RSV产生。 (A)用TG或对照DMSO灌注HEp2和A549 30分钟,用PBS洗涤并在RSV感染前在正常培养基中孵育24小时,或(B)首先在TG 30分钟之前用RSV感染24小时启动。 TG诱导的抗病毒状态持续至少48小时。如图所示,用TG或DMSO对照将HEp2(C)和A549(D)细胞灌注30分钟,用PBS洗涤,再进行24或48小时的正常培养;之后,细胞被RSV感染。所有细胞均以0.1 MOI感染RSV(A2株,ATCC VR-1540),共3天。收集离心的上清液感染HEp2细胞24小时,用小鼠抗RSV(2F7)抗体(pfu / mL)免疫检测RSV。2向ANOVA(Sidak的多次比较)的意义与相应的DMSO控件有关。与A549细胞相比,HEp2细胞更易于RSV复制。 TG抑制RSV转录。在RSV感染之前,立即用0.5µMTG灌注HEp2细胞(E)30分钟,在RSV感染之前(F)用TG灌注HEp2细胞30分钟,用PBS洗涤并培养48小时。总共感染3天后,提取总RNA进行cDNA转换,以量化标准化为18srRNA的病毒基因(L基因,M基因和F基因)表达。通过相对于相应DMSO对照中表达的未配对t检验确定显着性。 (G)用指定浓度的TG或DMSO对照预孵育30分钟的(Hp2和(H)A549细胞)用PBS洗涤,在无血清培养基(Opti-MEM)中培养过夜,并进行细胞活力测定(CellTiter-Glo®发光细胞活力测定试剂盒,Promega)。水平条=平均值(红色)±标准偏差;ns =不重要。与Dunnett进行多次比较的单向方差分析的意义是相对于相应的DMSO控件而言的。所有测定均一式三份,进行三次。 *p <0.05和**** p <0.0001。 图2. TG作为抗病毒药比利巴韦林更有效,显示出高选择性指数并阻止病毒转录和病毒蛋白产生。如前所述,在培养基中或在单独培养基中连续存在利巴韦林时,将HEp2细胞用TG,利巴韦林或DMSO对照引发30分钟,如前所述用PBS洗涤并用RSV感染(用于TG或DMSO对照)。以4 dpi收获培养基,用于(A)子代病毒滴定(pfu /mL)和(B)通过一步反转录-qPCR检测病毒L基因RNA。除非另有说明,否则单向ANOVA(Tukey的多次比较)的显着性是相对于DMSO控件而言的。在HEp2细胞的RSV感染中,TG的相应选择性指数(SI)估计为984(C,D)。在TG的感染前引发范围内,分别通过pfu / mL病毒滴定和发光细胞活力测定法确定HEp2细胞中TG对RSv的有效浓度(EC)和细胞毒性浓度(CC)。 SI = CC50 / EC50 = 63.43 / 0.06447 = 983.9。 EC90 = 84.55 nM。如图所示,用TG或DMSO对照引发NHBE细胞30分钟,用PBS洗涤并以0.1 MOI感染RSV。在48 hpi时,通过一步反转录qPCR(E)收集用于检测病毒L基因RNA的培养基,提取总RNA进行cDNA转化以定量病毒基因的表达(L基因,F -基因和M基因)标准化为18s rRNA(F)。单向ANOVA(Dunnett的多重比较)(E)和两向ANOVA(Tukey的多重比较)(F)的意义与DMSO控件有关。 TG还抑制NHBE细胞中病毒F蛋白的产生。如图所示,用TG或DMSO对照灌注细胞30分钟,用PBS洗涤,并在80℃下用RSV感染0.05 MOI持续48小时,并直接免疫染色是否存在RSV F蛋白(G,H)。以100倍放大率拍摄的图像。随着TG启动剂量的增加,RSV阳性细胞(pfu)的数量明显减少。单向方差分析(Dunnett的多次比较)的意义与DMSO控件有关。 * p <0.05,*** p <0.001和**** p <0.0001。图3. NHBE细胞的TG引发增加了ER应激基因的表达(感染前和感染后)和RIG-I信号传导相关基因的基础表达,但是在感染过程中,RIG-I关联基因的诱导是衰减。用TG或DMSO对照引发细胞30分钟,用PBS洗涤并在0.05 MOI下用RSV感染48小时,然后提取总RNA进行cDNA转化以定量ER应激基因的表达(A)DDIT3,(B)HSPA5 (C)HSP90B1。将表达标准化为18s rRNA,通过2向ANOVA(Sidak的多次比较)确定的显着性相对于相应的DMSO对照。有一致的迹象表明,TG启动引发了RIG-I相关基因RIG-I(D),IFNB(E)(以及相应的IFNB蛋白(F))和RNASEL(G)的感染前激活。在16hpi对上清液进行IFNB ELISA。将所有RNA表达标准化为18s rRNA,并通过单向ANOVA和Dunnett的多重比较(D)或2向ANOVATukey的多重比较(E–G)确定的显着性相对于相应的DMSO对照。所有测定均一式三份,进行三次。*p <0.05,** p <0.01,*** p <0.001和**** p<0.0001。 图4. TG抑制OC43病毒的转录和蛋白质的产生,作为抗病毒剂比羟氯喹和瑞姆昔韦更有效,并且显示出高选择性。 (A,B)用TG引发A549细胞30分钟,用PBS洗涤两次,并在0.5MOI下用OC43感染3小时。然后,将细胞再次用PBS洗涤,并在无血清培养基(补充有0.1 µg / mL TPCK胰蛋白酶的Optii-MEM)中培养48小时,然后从(A)培养基和(B)细胞中提取RNA,分别进行反转录qPCR和cDNA转换,再进行qPCR,以检测病毒OC43复制酶多蛋白1ab RNA。 cDNA定量标准化为18s rRNA。 (C)使用重复的孔组进行细胞蛋白提取,以通过蛋白质印迹法检测OC43 NP。 (D,E)如图所示,用TG,羟氯喹(HC)或DMSO / PBS对照对MRC5细胞进行预处理,持续30分钟,用PBS洗涤两次,用OC43(0.01 MOI)感染3 h,再用PBS两次,最后在无化合物(感染前)或持续存在HC(连续)的情况下用无血清培养基补充。在2 dpi时,收集培养基用于(D)通过一步反转录qPCR检测病毒多蛋白1abRNA和(E)通过感染A549细胞24小时并免疫染色是否存在病毒NP来直接检测子代病毒。以100倍放大率拍摄的图像。所指示的显着性(通过单向方差分析确定)和病毒RNA检测的降低百分比相对于相应的对照。 (F,G)TG在阻止OC43(F)和甲型流感病毒(G方面优于伦德韦(RDV))复制。用指示的TG,0.3 µM RDV或DMSO对照对A549细胞进行初次免疫30分钟,用PBS洗涤两次,并用0.01 MOI的CoVOC43或1.0 MOI的苏联H1N1病毒感染2小时,然后再次用PBS,然后在无血清培养基中孵育TG引发的细胞,或在连续存在RDV的培养基中孵育。在24、48和72 hpi时,基于相对Ct方法,对收集的上清液进行病毒RNA提取,然后进行一步反转录qPCR,以检测OC43复制酶多蛋白1ab RNA或流感M基因RNA的相对拷贝数。 。所指示的显着性是相对于基于2通ANOVA Dunnett(F)或Tukey(G)多重比较测试的RDV处理过的细胞而言的。 (H)RDV和TG处理对细胞活力没有不利影响。将A549细胞用RDV连续处理,或用指定的TG或DMSO处理30分钟,洗涤,培养过夜,然后进行细胞活力测定(CellTiter-Glo 2.0细胞活力测定,Promega)。通过单因素方差分析相对于DMSO对照确定指示的显着性。 (I)TG对OC43的抑制作用的选择性指数(CC50 / EC50)估计在7072和9227之间。EC90= 0.02622 µM。用TG(0至91 µM)灌注MRC5细胞30分钟,用PBS洗涤两次,并在含10%FCS和1%P / S的DMEM Glutamax中培养过夜。用CellTiter-Glo 2.0细胞活力测定(Promega)进行细胞活力测定(CC50)。有效或抑制TG的剂量反应(EC50)是基于以指定浓度的TG(0至0.5 µM)灌注MRC5细胞30分钟,然后进行PBS洗涤和以0.01 MOI的OC43感染。感染后三天,收集上清液用于RNA提取和一步反转录qPCR以定量病毒RNA(多蛋白1ab RNA)的存在。 CC=细胞毒性; EC =有效浓度。 ** p <0.01,*** p<0.001和**** p <0.0001。接下来,评估了在OC43病毒感染之前和期间对TG启动的ER应激反应。在A549细胞中,TG以剂量依赖性方式基础上和在感染过程中刺激ER应激基因的表达。 TG诱导的A549细胞OC43感染的ER应激基因图谱(图5A,C)与NHBE细胞的RSV感染的TG应激基因图谱高度相似(图3A,C)。在A549细胞中,TG启动似乎对RIG-I相关基因(RIG-I,IFNB和OAS1)的基础转录几乎没有影响。像在NHBE细胞的RSV感染中(图3D,G)一样,在TG引发的细胞的OC43感染过程中,RIG-I相关基因的诱导也减弱了(图5D,F)。因此,在OC43感染期间降低RIG-I相关基因的转录诱导也是TG介导的OC43病毒抑制的特征。重要的是,感染前TG引发的A549细胞与OC43病毒和苏联H1N1甲型流感病毒的共同感染(图5H)一样,能够抑制单独的病毒感染(图5G)。总之,A549细胞的TG引发在基础上和OC43感染期间增加了ER应激基因的表达,在感染期间减弱了RIG-1信号相关基因的诱导,并抑制了与OC43和流感病毒的共感染。1.1. TG阻止子代SARS-CoV-2生产SARS-CoV-2与OC43病毒一样易受TG抑制。用TG对Calu-3和NHBE细胞进行感染前预感染可阻断SARS-CoV-2复制(图6A,C),这与在A549和MRC5细胞中用OC43病毒所见的抑制作用相当(图4A,D)。在Calu-3细胞中,用SARS-CoV-2在TG感染24小时后用TG引发感染后30分钟也有效抑制病毒,表明其在SARS-CoV-2感染中具有治疗潜力(图6B)。与流感病毒抑制一样[14],TG无法抑制SARS-CoV-2在Vero E6细胞中的复制,这表明完整的I型IFN系统对于TG介导的宿主抗病毒应答是必需的(图6D)。通过子代病毒RNA检测(图6E–H)和传染性子代确定,TG的广谱抗病毒效力在单独的病毒感染中与在SARS-CoV-2和pdm H1N1病毒共感染中一样明显在感染的Calu-3细胞的培养基中通过TCID50分析检测病毒(图6I–K)。在72 hpi下,在单个病毒中,相对于相应的DMSO对照,0.5 µM TG引发的细胞相对于相应的DMSO对照,抑制SARS-CoV-2后代病毒产生300倍(99.7%)和880倍(99.9%)。感染(图6I)和共同感染(图6J)。相对于相应的DMSO对照,在以0.5 µM TG引发的共感染细胞72 hpi时,pdmH1N1病毒的产量降低了11倍(93.3%)(图6K)。总体而言,在单病毒比较(图6E,F)和共感染(图6G,H)中,SARS-CoV-2与dd H1N1病毒感染相比,TG引发的后代病毒减少比例更高。这表明SARS-CoV -2比dm H1N1病毒对TG抑制更敏感。总之,TG是一种广谱抗病毒药物,主要针对人类主要呼吸道呼吸道合胞病毒,冠状病毒(特别是SARS-CoV-2)和甲型流感病毒,不能区分单病毒感染和复合病毒感染。图5. A549细胞的TG引发在基础上和在OC43感染期间增加了ER应激基因的表达,在感染期间减弱了RIG-I信号相关基因的诱导,并抑制了与OC43和流感病毒的共感染。 (A–C)。TG引发似乎以剂量依赖的方式刺激内质网应激基因的表达。 (D–F)TG在感染过程中减弱了RIG-I相关基因的诱导。 A549细胞用TG引发30分钟,用PBS洗涤两次,并在0.5 MOI下用OC43感染3小时;此后,再次用PBS洗涤细胞,并在无血清培养基中培养24小时,然后收集细胞裂解液用于RNA提取和cDNA转化,用于(A)DDIT3,(B)HSPA5,(C)HSP90B1,(D )RIG-1,(E)IFNB和(F)OAS1。将所有表达标准化为18s rRNA。意义相对于基于2向ANOVA(Tukey的多次比较)的相应DMSO控件。 (G,H)在单独的病毒感染或共同感染中,TG在A549细胞中抑制了OC43病毒和苏联H1N1病毒的复制。将细胞用TG灌注30分钟,用PBS洗涤两次,并在OC43病毒和OC43病毒和US H1N1病毒感染下单病毒感染或共同感染3 h分别为0.01和1.5 MOI(基于FFA);之后,将细胞再次用PBS洗涤两次,并在无血清培养基中孵育。在48 hpi收获培养基用于病毒RNA提取,然后进行一步反转录qPCR,以检测OC43复制酶多蛋白1ab RNA和苏联H1N1 M基因RNA的相对拷贝数。所示的显着性基于2次方差分析Tukey的多次比较,并且病毒RNA检测的减少百分比相对于相应的DMSO对照。所有测定均一式三份,进行三次。 * p <0.05,** p <0.01,*** p <0.001和**** p <0.0001。 图6.在单病毒感染和与pdm H1N1病毒共感染中,TG有效地阻止了子代SARS-CoV-2的产生。 (A,C,D)Calu-3和NHBE细胞的感染前TG引发,但不是Vero E6细胞,有效地抑制了子代病毒的输出。按照指示用TG灌注细胞30分钟,用PBS洗涤两次,并在80℃下感染SARS-CoV-2。0.01MOI 3小时;之后,将细胞再次用PBS洗涤两次,并在无血清培养基中孵育,该培养基中添加了0.2 µg /mL TPCK胰蛋白酶。在72 hpi的培养基上进行病毒RNA提取。 (B)在24 hpi用TG引发阻断了SARS-CoV-2在Calu-3细胞中的复制。首先以0.01 MOI的浓度将SARS-CoV-2细胞感染细胞24小时,然后用指示的TG灌注30分钟,用PBS洗涤3次并在无血清培养基中孵育。在48和72 hpi的培养基上进行病毒RNA提取。根据相对Ct方法,对以上分离的所有RNA进行一步反转录qPCR,以检测SARS-CoV-2复制酶多蛋白1ab RNA的相对拷贝数。用TG对Calu-3细胞进行预感染引发可抑制(E)SARS-CoV-2和(F)pdm H1N1病毒的单独感染,以及(G,H)两种病毒的共同感染。用TG或DMSO灌注细胞30分钟,用将相应的病毒以0.01 MOI的浓度持续2 h,用PBS洗涤3次,然后在无血清培养基中孵育。在感染后指定的时间点,对感染细胞的培养基进行采样以进行病毒RNA提取,以进行一步反转录qPCR,以检测SARS-CoV-2复制酶多蛋白1ab RNA(E,G)和流感的相对拷贝数M基因RNA(F,H)。 (IK)在相似感染的培养物上于24、48和72 hpi采集的培养基样本用于检测通过在Vero细胞中进行TCID50病毒滴定来检测存活的子代病毒(显示为平均值±SEM)。 (一)在单病毒感染中SARS-CoV-2,TG表现出剂量依赖性病毒抑制作用。在与SARS-CoV-2和pdm H1N1病毒共感染时,TG能够同时抑制SARS-CoV-2(J)和pdm H1N1病毒(K)。所示的显着性基于2向ANOVA Tukey的多次比较测试和相对于相应DMSO对照的病毒RNA变化百分比。 * p <0.05,** p<0.01和**** p <0.0001。3.4. TG甲型流感病毒的翻译后阻断可在致命病毒攻击中保护小鼠 我们先前发现TG抑制NHBE细胞和NPTr细胞中流感病毒复制的过程中,病毒NP和M1蛋白的病毒转录或产量几乎没有或没有变化,表明该病毒在翻译后被阻断了[14]。由于病毒NP和M1蛋白在胞质核糖体上被翻译成核输入,因此我们在这里检查了通过ER-高尔基体运往宿主细胞膜的病毒蛋白(HA,NA和M2)[25]。来自TG引发的NPTr细胞的病毒蛋白分析(图7A,B)显示,所有其他病毒蛋白的表达似乎也未受影响,这表明TG差异性靶向了流感病毒,RSV和冠状病毒的复制周期。由于TG的抗病毒作用在酸性pH值而不是在碱性pH值下稳定(图7C,D),因此在小鼠致命流感病毒攻击中评估了TG的口服治疗(感染后)功效。组中的每只BALB / c小鼠(每组n = 8)首先经鼻内感染3种MLD50的PR8 / H1N1病毒,第二天每天一次通过管饲法给予TG或oseltamivir,持续5天。低口服剂量TG(根据经验选择1.5 µg / kg /天)所赋予的保护作用与高剂量奥司他韦(45 mg / kg /天)对小鼠的保护作用相似。在治疗上,与PBS-PBS相比,TG治疗组的存活率显着提高(图7E),感染后3天和5天(dpi)的病毒脱落减少(图7F),体重减轻程度较轻(图7G,H)。 DMSO控制。七只,八只和两只小鼠全部在TG,奥司他韦和PBS +DMSO组中存活。在所有三个参数中,用TG和奥司他韦治疗的小鼠之间没有显着差异。因此,口服TG在遭受致死性流感病毒攻击的小鼠中赋予治疗保护。图7. TG在翻译后抑制甲型流感病毒,对酸稳定,在致命病毒攻击中具有治疗性保护小鼠的作用。 (A)由TG引发的NPTr细胞引起的流感后代产量急剧下降是(B),同时病毒蛋白没有下降。将细胞用TG灌注30分钟,用PBS洗涤两次,并以0.5 MOI的浓度感染USSR病毒2小时。之后,将细胞再次用PBS洗涤3次,并在无血清培养基中温育24小时,该培养基中添加了0.2 µgl /mL的TPCK胰蛋白酶。(A)用相应的培养基样品进行聚焦形成测定,以确定活病毒的产量(ffu / µL)。所示的显着性基于单向ANOVA(Dunnett的多重比较)和相对于相应DMSO对照的存活子代百分比。 (B)病毒蛋白,包括通过ER-高尔基体处理的蛋白(HA,NA和M2),未显示TG引发的细胞减少。(C,D)TG的抗病毒活性在酸性但不是碱性条件下是稳定的。(C)首先,将所用的TG首先按照指示在pH 1.5(在30mM盐酸中)孵育不同的时间,并用氢氧化钠中和,然后以0.5 µM的终浓度应用于细胞中30分钟。 (D)首先将所用的TG在pH12.0(10 mM氢氧化钠)中孵育2小时,并用盐酸中和,然后以0.5 µM的最终浓度将其应用于细胞30分钟。在以0.5 MOI的感染率感染苏联H1N1病毒后二十四小时,将感染的培养基用于6小时聚焦形成试验,以免疫检测病毒NP以确定子代病毒的产量(ffu/ µL)。除非另有说明,否则重要性基于单向ANOVA Tukey的多重比较,并且病毒减少的百分比与相应的DMSO控件有关。 (E–H)TG在小鼠致命流感病毒攻击中的治疗保护。组中的每只BALB / c小鼠(每组n= 8)都经鼻内感染了3种MLD50的PR8 / H1N1病毒。然后每天给每只小鼠口服一次TG(1.5 µg / kg /天),奥司他韦(45mg /kg /天)或PBS + DMSO,持续5天;第一次剂量为12 hpi。在14d内记录生存率(E),通过TCID50分析的肺病毒滴度(F)和体重变化(G,H)。每个时间点代表平均值±SEM。 Kaplan–Meier方法用于生存分析。相对于相应的TG组显示了显着性。 * p <0.05,** p <0.01,*** p <0.001和****p<0.0001。点击:查看文章结论 查看更多冠状病毒文章 查看更多医学文章 试用免费文档翻译功能 免责声明:福昕翻译只充当翻译功能,此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的,仅代表作者个人观点,与本网站无关,版权归原始网站所有。仅供读者参考,并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等,请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。 来源于:mdpi
2021-02-24 16:25:25
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COVID疫苗可以阻止传播吗?科学家竞相寻找答案
控制大流行病需要采取预防病毒传播的措施,但这一功能很难衡量。 可以阻止病毒传播的疫苗将有助于控制大流行。图片来源:Andrea Fasani / EPA-EFE / Shutterstock 随着各国推出预防COVID-19的疫苗,正在进行研究以确定注射疫苗是否还可以阻止人们感染和传播SARS-CoV-2病毒。如果将疫苗传播给足够多的人,则可以帮助控制该流行病。 初步分析表明,至少某些疫苗可能具有传播阻断作用。但是,要确认这种影响以及这种影响的强度是很棘手的,因为给定区域感染的下降可能是由其他因素(例如封锁和行为改变)解释的。不仅如此,该病毒还可以从无症状携带者传播,这使得很难检测到这些感染。 “这些是最难的研究之一,”马萨诸塞州波士顿的哈佛大学陈陈公共卫生学院传染病流行病学专家马克·利普西奇说。他说:“我们所有人都在那里,不停地尝试查看从确实出现的少量数据中可以得到什么。” 预计未来几周将获得一些研究的结果。 停止感染? 尽管大多数COVID-19疫苗的临床试验都表明疫苗可以预防这种疾病,但一些试验结果还提供了一些线索,表明注射
2021-02-22 19:36:27
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