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    2021-03-02 17:30:22
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  • 巴菲特致股东的封（2020）4/5
    查看上部分内容Each company was started by a young man who had graduated from the University of Tennessee and stayed put in Knoxville. Neither had a meaningful amount of capital nor wealthy parents.每个公司都是由一个从田纳西大学毕业并留在诺克斯维尔的年轻人创立的。他们既没有可观的资本额，也没有富裕的父母。But, so what? Today, Clayton and Pilot each have annual pre-tax earnings of more than $1 billion. Together they employ about 47,000 men and women.但是，那又如何呢？如今，Clayton和Pilot的年税前收益均超过10亿美元。他们一共雇用了大约47,000名男女。Jim Clayton, after several other business ventures, founded Clayton Homes on a shoestring in 1956, and “Big Jim” Haslam started what became Pilot Travel Centers in 1958 by purchasing a service station for $6,000. Each of the men later brought into the business a son with the same passion, values and brains as his father. Sometimes there is a magic to genes.吉姆·克莱顿（Jim Clayton）在经历了数次其他商业冒险之后，于1956年凭空成立了克莱顿之家（Clayton Homes），“大吉姆”·哈斯拉姆（Big Jim）Haslam于1958年以6,000美元的价格购买了加油站，开办了飞行员旅行中心。后来，每个人都把一个与父亲一样具有激情，价值观和智慧的儿子带入了企业。有时候基因有魔力。“Big Jim” Haslam, now 90, has recently authored an inspirational book in which he relates how Jim Clayton’s son, Kevin, encouraged the Haslams to sell a large portion of Pilot to Berkshire. Every retailer knows that satisfied customers are a store’s best salespeople. That’s true when businesses are changing hands as well.现年90岁的“大吉姆”哈斯拉姆最近写了一本鼓舞人心的书，他在书中讲述了吉姆·克莱顿的儿子凯文如何鼓励哈斯拉姆人将飞行员的大部分出售给伯克希尔。每个零售商都知道，满意的顾客是商店的最佳推销员。当企业也在易手时也是如此。* * * * * * * * * * * *=When you next fly over Knoxville or Omaha, tip your hat to the Claytons, Haslams and Blumkins as well as to the army of successful entrepreneurs who populate every part of our country. These builders needed America’s framework for prosperity – a unique experiment when it was crafted in 1789 – to achieve their potential. In turn, America needed citizens like Jim C., Jim H., Mrs. B and Louie to accomplish the miracles our founding fathers sought.当您下次飞越诺克斯维尔或奥马哈时，向克莱顿一家，哈斯拉姆一家和布鲁姆金斯一家以及遍布全国各地的成功企业家大部队致敬。这些建筑商需要美国的繁荣框架（这是1789年精心打造的一次独特实验）才能发挥其潜力。反过来，美国需要像吉姆C.，吉姆H.，B太太和路易丝这样的公民来实现我们开国元勋所追求的奇迹。Today, many people forge similar miracles throughout the world, creating a spread of prosperity that benefits all of humanity. In its brief 232 years of existence, however, there has been no incubator for unleashing human potential like America. Despite some severe interruptions, our country’s economic progress has been breathtaking.今天，许多人在世界各地伪造类似的奇迹，创造了使全人类受益的繁荣繁荣。然而，在其短暂的232年历史中，还没有孵化器能够像美国那样释放人类的潜能。尽管出现了严重的中断，但我国的经济发展却令人叹为观止。Beyond that, we retain our constitutional aspiration of becoming “a more perfect union.” Progress on that front has been slow, uneven and often discouraging. We have, however, moved forward and will continue to do so.除此之外，我们保留着成为“更完美的联盟”的宪政愿望。在这方面的进展缓慢，参差不齐，常常令人沮丧。但是，我们已经向前迈进，并将继续这样做。Our unwavering conclusion: Never bet against America.我们坚定不移的结论：永远不要对美国下注。 The Berkshire Partnership伯克希尔伙伴关系Berkshire is a Delaware corporation, and our directors must follow the state’s laws. Among them is a requirement that board members must act in the best interest of the corporation and its stockholders. Our directors embrace that doctrine.伯克希尔是特拉华州的一家公司，我们的董事必须遵守该州的法律。其中一项要求是，董事会成员必须为公司及其股东的最佳利益行事。我们的董事信奉该学说。In addition, of course, Berkshire directors want the company to delight its customers, to develop and reward the talents of its 360,000 associates, to behave honorably with lenders and to be regarded as a good citizen of the many cities and states in which we operate. We value these four important constituencies.此外，当然，伯克希尔哈撒韦公司董事希望该公司取悦客户，发展和奖励其360,000名员工的才干，与放贷人保持良好的行为举止，并被视为我们经营所在的许多城市和州的良好公民。 。我们重视这四个重要选区。None of these groups, however, have a vote in determining such matters as dividends, strategic direction, CEO selection, or acquisitions and divestitures. Responsibilities like those fall solely on Berkshire’s directors, who must faithfully represent the long-term interests of the corporation and its owners.但是，这些集团都没有投票权来决定诸如股息，战略方向，CEO的选择，收购或资产剥离等事项。像这样的责任完全落在伯克希尔·哈撒韦的董事身上，他们必须忠实地代表公司及其所有者的长期利益。Beyond legal requirements, Charlie and I feel a special obligation to the many individual shareholders of Berkshire. A bit of personal history may help you to understand our unusual attachment and how it shapes our behavior.除了法律要求之外，我和查理还对伯克希尔哈撒韦的许多个人股东负有特殊义务。一点个人经历可能会帮助您了解我们不寻常的依恋关系以及它如何影响我们的行为。* * * * * * * * * * * *Before my Berkshire years, I managed money for many individuals through a series of partnerships, the first three of those formed in 1956. As time passed, the use of multiple entities became unwieldy and, in 1962, we amalgamated 12 partnerships into a single unit, Buffett Partnership Ltd. (“BPL”).在我伯克希尔任职之前，我通过一系列合伙关系为许多个人管理资金，最早的三个合伙人于1956年成立。随着时间的流逝，使用多个实体变得笨拙，1962年，我们将12个合伙关系合并为一个单位巴菲特合伙企业有限公司（“ BPL”）。By that year, virtually all of my own money, and that of my wife as well, had become invested alongside the funds of my many limited partners. I received no salary or fees. Instead, as the general partner, I was compensated by my limited partners only after they secured returns above an annual threshold of 6%. If returns failed to meet that level, the shortfall was to be carried forward against my share of future profits. (Fortunately, that never happened: Partnership returns always exceeded the 6% “bogey.”) As the years went by, a large part of the resources of my parents, siblings, aunts, uncles, cousins and in-laws became invested in the partnership.到那年，几乎所有我自己的钱，以及我妻子的所有钱，都与我许多有限合伙人的资金一起投入了。我没有收到薪水或费用。相反，作为普通合伙人，只有在我的有限合伙人获得了高于6％的年度门槛的回报之后，我才能获得报酬。如果收益未能达到该水平，则应将我应得的未来利润中的差额结转。 （幸运的是，这从未发生过：合伙企业的回报率总是超过6％的“柏忌”。）随着岁月的流逝，我父母，兄弟姐妹，阿姨，叔叔，堂兄弟和姻亲的大部分资源都投入了合伙。Charlie formed his partnership in 1962 and operated much as I did. Neither of us had any institutional investors, and very few of our partners were financially sophisticated. The people who joined our ventures simply trusted us to treat their money as we treated our own. These individuals – either intuitively or by relying on the advice of friends – correctly concluded that Charlie and I had an extreme aversion to permanent loss of capital and that we would not have accepted their money unless we expected to do reasonably well with it.查理（Charlie）于1962年成立了他的合伙公司，并且运作得像我一样。我们俩都没有机构投资者，而且我们的合作伙伴在财务上也很少。加入我们的企业的人只是相信我们会像对待自己的钱一样对待他们的钱。这些人（无论是凭直觉还是依靠朋友的建议）正确地得出结论，查理和我对永久性资本损失极度厌恶，除非我们期望自己做得很好，否则我们不会接受他们的钱。I stumbled into business management after BPL acquired control of Berkshire in 1965. Later still, in 1969, we decided to dissolve BPL. After yearend, the partnership distributed, pro-rata, all of its cash along with three stocks, the largest by value being BPL’s 70.5% interest in Berkshire.在1965年BPL取得伯克希尔哈撒韦的控制权后，我偶然涉足业务管理。后来，在1969年，我们决定解散BPL。年底后，合伙企业按比例分配了其所有现金以及三只股票，按价值计算，最大的一笔交易是BPL在Berkshire的70.5％的权益。Charlie, meanwhile, wound up his operation in 1977. Among the assets he distributed to partners was a major interest in Blue Chip Stamps, a company his partnership, Berkshire and I jointly controlled. Blue Chip was also among the three stocks my partnership had distributed upon its dissolution.同时，查理（Charlie）在1977年结束了业务。他分配给合作伙伴的资产中包括对蓝筹邮票（Blue Chip Stamps）的主要兴趣，该公司是他与合伙人，伯克希尔和我共同控制的公司。蓝筹股也是我合伙解散后分配的三只股票之一。In 1983, Berkshire and Blue Chip merged, thereby expanding Berkshire’s base of registered shareholders from 1,900 to 2,900. Charlie and I wanted everyone – old, new and prospective shareholders – to be on the same page.1983年，伯克希尔与Blue Chip合并，从而将伯克希尔的注册股东基础从1900名扩大到了2900名。查理和我希望所有人，包括新老股东和潜在股东，都在同一页面上。Therefore, the 1983 annual report – up front – laid out Berkshire’s “major business principles.” The first principle began: “Although our form is corporate, our attitude is partnership.” That defined our relationship in 1983; it defines it today. Charlie and I – and our directors as well – believe this dictum will serve Berkshire well for many decades to come.因此，1983年的年度报告（前期）列出了伯克希尔的“主要业务原则”。第一条原则开始了：“尽管我们的形式是公司，但我们的态度是伙伴关系。” 1983年，这定义了我们的关系。它今天定义了它。查理和我-以及我们的董事们-相信这一格言将在未来数十年中为伯克希尔公司提供良好的服务。* * * * * * * * * * * *Ownership of Berkshire now resides in five large “buckets,” one occupied by me as a “founder” of sorts.伯克希尔哈撒韦的所有权现在位于五个大型“桶”中，其中一个由我以某种“创始人”的身份占领。That bucket is certain to empty as the shares I own are annually distributed to various philanthropies.由于我每年拥有的股份分配给各种慈善事业，因此这个水桶肯定是空的。Two of the remaining four buckets are filled by institutional investors, each handling other people’s money. That, however, is where the similarity between those buckets ends: Their investing procedures could not be more different.剩下的四个桶中的两个由机构投资者填补，每个人处理别人的钱。然而，这就是这些桶之间相似之处的终结：他们的投资程序再无不同。In one institutional bucket are index funds, a large and mushrooming segment of the investment world. These funds simply mimic the index that they track. The favorite of index investors is the S&P 500, of which Berkshire is a component. Index funds, it should be emphasized, own Berkshire shares simply because they are required to do so. They are on automatic pilot, buying and selling only for “weighting” purposes.指数基金仅占一个机构类别，它是投资界中一个庞大且蓬勃发展的部分。这些资金只是模仿他们追踪的指数。指数投资者最喜欢的是S＆P 500，伯克希尔是其中的一员。应该强调的是，指数基金拥有伯克希尔股票的原因仅仅是因为它们必须这样做。他们处于自动驾驶状态，仅出于“加权”目的进行买卖。点击查看：2020年下部分双语译文内容 往期巴菲特致股东的信 使用双语译文翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。
    2021-03-02 16:25:37
    19883
  • 巴菲特致股东的封（2020）结尾
    查看上部分内容BNSF began operations in 1850 with a 12-mile line in northeastern Illinois. Today, it has 390 antecedents whose railroads have been purchased or merged. The company’s extensive lineage is laid out at http://www.bnsf.com/bnsf-resources/pdf/about-bnsf/History_and_Legacy.pdf.BNSF于1850年在伊利诺伊州东北部的一条12英里长的线开始运营。如今，它已购买或合并了390条铁路的前身。该公司的广泛血统位于http://www.bnsf.com/bnsf-resources/pdf/about-bnsf/History_and_Legacy.pdf。Berkshire acquired BNSF early in 2010. Since our purchase, the railroad h
    2021-03-02 16:25:07
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  • 巴菲特致股东的封（2020）5/5
    点击查看上部分内容In the other institutional bucket are professionals who manage their clients’ money, whether those funds belong to wealthy individuals, universities, pensioners or whomever. These professional managers have a mandate to move funds from one investment to another based on their judgment as to valuation and prospects. That is an honorable, though difficult, occupation.另一个机构机构是管理客户资金的专业人员，无论这些资金属于富人，大学，养老金领取者还是其他人。这些专业经理根据对估值和前景的判断，有权将资金从一项投资转移到另一项投资。这是一个光荣的，尽管困难的职业。We are happy to work for this “active” group, while they meanwhile search for a better place to deploy the funds of their clientele. Some managers, to be sure, have a long-term focus and trade very infrequently. Others use computers employing algorithms that may direct the purchase or sale of shares in a nano-second. Some professional investors will come and go based upon their macro-economic judgments.我们很高兴为这个“活跃”的团队工作，与此同时，他们正在寻找更好的地方来部署其客户的资金。可以肯定的是，一些经理长期关注并且很少交易。其他人则使用采用算法的计算机，这些算法可以在十亿分之一秒的时间内指导股票的购买或出售。一些专业投资者会根据他们的宏观经济判断来来去去。Our fourth bucket consists of individual shareholders who operate in a manner similar to the active institutional managers I’ve just described. These owners, understandably, think of their Berkshire shares as a possible source of funds when they see another investment that excites them. We have no quarrel with that attitude, which is similar to the way we look at some of the equities we own at Berkshire.我们的第四类包括个人股东，他们的运作方式与我刚刚描述的活跃的机构经理类似。可以理解的是，当他们看到伯克希尔股票的另一笔投资能够激发他们的兴趣时，他们会把他们的伯克希尔股票视为一种可能的资金来源。我们对此态度没有争执，这与我们看待伯克希尔哈撒韦拥有的某些股票的方式类似。All of that said, Charlie and I would be less than human if we did not feel a special kinship with our fifth bucket: the million-plus individual investors who simply trust us to represent their interests, whatever the future may bring. They have joined us with no intent to leave, adopting a mindset similar to that held by our original partners. Indeed, many investors from our partnership years, and/or their descendants, remain substantial owners of Berkshire.所有这些都表明，如果我们对第五个桶子没有特殊的亲戚关系，我和查理将比人类更小：超过百万的个人投资者，他们简单地相信我们代表他们的利益，而不管未来可能带来什么。他们加入我们的意图是无意离开，他们采用的态度与我们最初的合作伙伴所持的态度相似。确实，我们合伙制时代以来的许多投资者和/或其后代仍然是伯克希尔的主要所有者。A prototype of those veterans is Stan Truhlsen, a cheerful and generous Omaha ophthalmologist as well as personal friend, who turned 100 on November 13, 2020. In 1959, Stan, along with 10 other young Omaha doctors, formed a partnership with me. The docs creatively labeled their venture Emdee, Ltd. Annually, they joined my wife and me for a celebratory dinner at our home.这些经验丰富的人的原型是斯坦·特鲁尔森（Stan Truhlsen），他是开朗，慷慨的奥马哈眼科医生，也是个人朋友，他于2020年11月13日年满100岁。1959年，斯坦与其他10位年轻的奥马哈医生一起与我建立了伙伴关系。这些文档创造性地标记了他们的合资企业Emdee，Ltd。每年，他们与我和我的妻子一起在我们家里举行庆祝晚宴。When our partnership distributed its Berkshire shares in 1969, all of the doctors kept the stock they received. They may not have known the ins and outs of investing or accounting, but they did know that at Berkshire they would be treated as partners.当我们的合伙企业在1969年分配伯克希尔股票时，所有医生都保留了收到的股票。他们可能不知道投资或会计的来龙去脉，但他们确实知道在伯克希尔，他们将被视为合伙人。Two of Stan’s comrades from Emdee are now in their high-90s and continue to hold Berkshire shares. This group’s startling durability – along with the fact that Charlie and I are 97 and 90, respectively – serves up an interesting question: Could it be that Berkshire ownership fosters longevity?来自Emdee的Stan的两个同志现在处于90年代的高位，并继续持有Berkshire的股票。这个小组令人吃惊的耐用性-以及我和查理分别是97岁和90岁这一事实提出了一个有趣的问题：伯克希尔·哈撒韦的所有权会促进人们的长寿吗？* * * * * * * * * * * *Berkshire’s unusual and valued family of individual shareholders may add to your understanding of our reluctance to court Wall Street analysts and institutional investors. We already have the investors we want and don’t think that they, on balance, would be upgraded by replacements.伯克希尔·哈撒韦公司不寻常且有价值的个人股东家族可能会增加您对我们不愿向华尔街分析师和机构投资者提起诉讼的理解。我们已经有了想要的投资者，总的来说，他们认为他们不会因为替换而升级。There are only so many seats – that is, shares outstanding – available for Berkshire ownership. And we very much like the people already occupying them.伯克希尔拥有的席位只有这么多（即流通股）。我们非常喜欢已经占领他们的人们。Of course, some turnover in “partners” will occur. Charlie and I hope, however, that it will be minimal. Who, after all, seeks rapid turnover in friends, neighbors or marriage?当然，“合作伙伴”会发生一些更替。但是，查理和我希望这将是最小的。毕竟，谁寻求朋友，邻居或婚姻的快速周转？In 1958, Phil Fisher wrote a superb book on investing. In it, he analogized running a public company to managing a restaurant. If you are seeking diners, he said, you can attract a clientele and prosper featuring either hamburgers served with a Coke or a French cuisine accompanied by exotic wines. But you must not, Fisher warned, capriciously switch from one to the other: Your message to potential customers must be consistent with what they will find upon entering your premises.1958年，菲尔·费舍尔（Phil Fisher）写了一本关于投资的精湛著作。在其中，他将经营一家上市公司比作一家餐厅的管理公司。他说，如果您正在寻找就餐者，那么您可以吸引顾客并繁荣起来，无论是汉堡配可乐还是法国料理以及异国情调的葡萄酒。费舍尔警告说，但您一定不能随意从一个切换到另一个：向潜在客户传达的信息必须与他们进入您的场所时所能找到的一致。At Berkshire, we have been serving hamburgers and Coke for 56 years. We cherish the clientele this fare has attracted.在伯克郡，我们已经为汉堡包和可乐服务了56年。我们珍惜这种票价吸引的顾客。The tens of millions of other investors and speculators in the United States and elsewhere have a wide variety of equity choices to fit their tastes. They will find CEOs and market gurus with enticing ideas. If they want price targets, managed earnings and “stories,” they will not lack suitors. “Technicians” will confidently instruct them as to what some wiggles on a chart portend for a stock’s next move. The calls for action will never stop.美国和其他地区的数千万其他投资者和投机者可以根据自己的喜好选择各种各样的股票。他们会发现具有诱人想法的CEO和市场大师。如果他们想要价格目标，可管理的收益和“故事”，他们将不会缺乏追求者。 “技术人员”将自信地指示他们图表上的一些波动预示着股票的下一步走势。采取行动的呼声永远不会停止。Many of those investors, I should add, will do quite well. After all, ownership of stocks is very much a “positive-sum” game. Indeed, a patient and level-headed monkey, who constructs a portfolio by throwing 50 darts at a board listing all of the S&P 500, will – over time – enjoy dividends and capital gains, just as long as it never gets tempted to make changes in its original “selections.”我应该补充说，其中许多投资者会做得很好。毕竟，股票所有权在很大程度上是一种“正和”博弈。确实，耐心和头脑平凡的猴子通过在列出所有标准普尔500指数的董事会上投掷50支飞镖来构建投资组合，只要不曾尝试进行更改，它就会随着时间的流逝而享有股利和资本收益。以其原始的“选择”。Productive assets such as farms, real estate and, yes, business ownership produce wealth – lots of it. Most owners of such properties will be rewarded. All that’s required is the passage of time, an inner calm, ample diversification and a minimization of transactions and fees. Still, investors must never forget that their expenses are Wall Street’s income. And, unlike my monkey, Wall Streeters do not work for peanuts.农场，房地产等生产性资产，以及企业所有权，都会产生财富-其中很多。这些财产的大多数所有者将得到奖励。所需要的只是时间的流逝，内心的平静，丰富的多样化以及交易和费用的最小化。尽管如此，投资者仍然不能忘记他们的支出是华尔街的收入。而且，与我的猴子不同，华尔街人对花生不起作用。When seats open up at Berkshire – and we hope they are few – we want them to be occupied by newcomers who understand and desire what we offer. After decades of management, Charlie and I remain unable to promise results. We can and do, however, pledge to treat you as partners.当伯克希尔的席位开放时-我们希望他们的席位很少-我们希望它们被理解并渴望我们提供的产品的新来者所占据。经过数十年的管理，查理和我仍然无法保证结果。但是，我们可以并且确实保证将您视为合作伙伴。And so, too, will our successors.我们的继任者也将如此。 A Berkshire Number that May Surprise You伯克希尔郡的数字可能会让你感到惊讶Recently, I learned a fact about our company that I had never suspected: Berkshire owns American-based property, plant and equipment – the sort of assets that make up the “business infrastructure” of our country – with a GAAP valuation exceeding the amount owned by any other U.S. company. Berkshire’s depreciated cost of these domestic “fixed assets” is $154 billion. Next in line on this list is AT&T, with property, plant and equipment of $127 billion.最近，我了解到了一个我公司从未怀疑的事实：伯克希尔拥有美国的不动产，厂场和设备-构成我们国家“业务基础设施”的那种资产-GAAP估值超过其拥有的金额由任何其他美国公司提供。伯克希尔对这些国内“固定资产”的折旧成本为1540亿美元。紧随其后的是美国电话电报公司（AT＆T），其不动产，厂场和设备为1,270亿美元。Our leadership in fixed-asset ownership, I should add, does not, in itself, signal an investment triumph. The best results occur at companies that require minimal assets to conduct high-margin businesses – and offer goods or services that will expand their sales volume with only minor needs for additional capital. We, in fact, own a few of these exceptional businesses, but they are relatively small and, at best, grow slowly.我要补充一点，我们在固定资产所有权方面的领导地位本身并不表示投资取得了胜利。最好的结果发生在那些需要最少资产来开展高利润业务的公司，并提供商品或服务来扩大销售量而只需要很少的额外资金。实际上，我们拥有其中一些杰出的业务，但它们规模较小，充其量只能缓慢发展。Asset-heavy companies, however, can be good investments. Indeed, we are delighted with our two giants – BNSF and BHE: In 2011, Berkshire’s first full year of BNSF ownership, the two companies had combined earnings of $4.2 billion. In 2020, a tough year for many businesses, the pair earned $8.3 billion.但是，拥有大量资产的公司可能是不错的投资。的确，我们对两家巨头-BNSF和BHE感到很高兴：在2011年，伯克希尔哈撒韦拥有BNSF的第一个完整年度，两家公司的总收入达到了42亿美元。 2020年对许多企业来说都是艰难的一年，两人赚了83亿美元。BNSF and BHE will require major capital expenditures for decades to come. The good news is that both are likely to deliver appropriate returns on the incremental investment.BNSF和BHE在未来几十年将需要大量资本支出。好消息是，两者都有可能为增量投资带来适当的回报。Let’s look first at BNSF. Your railroad carries about 15% of all non-local ton-miles (a ton of freight moved one mile) of goods that move in the United States, whether by rail, truck, pipeline, barge or aircraft. By a significant margin, BNSF’s loads top those of any other carrier.首先让我们看一下BNSF。您的铁路运送在美国境内运输的所有非本地吨英里（一吨货物移动一英里）中的15％，无论是通过铁路，卡车，管道，驳船还是飞机。 BNSF的负载可观的是其他任何运营商的最高负载。The history of American railroads is fascinating. After 150 years or so of frenzied construction, skullduggery, overbuilding, bankruptcies, reorganizations and mergers, the railroad industry finally emerged a few decades ago as mature and rationalized.美国铁路的历史令人着迷。经过150年左右的疯狂建设，抢劫，过度建筑，破产，重组和兼并，经过几十年的成熟和合理化，铁路行业终于出现了。点击查看：2020结尾双语译文内容 往期巴菲特致股东的信 使用双语译文翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。
    2021-03-02 16:25:00
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  • 巴菲特致股东的封（2020）2/5
    巴菲特致股东的封（2020）上If that strategy requires little or no effort on our part, so much the better. In contrast to the scoring system utilized in diving competitions, you are awarded no points in business endeavors for “degree of difficulty.” Furthermore, as Ronald Reagan cautioned: “It’s said that hard work never killed anyone, but I say why take the chance?”如果我们不需要或只需很少的努力，那就更好了。与潜水比赛中使用的计分系统相比，您在“艰苦程度”方面的商业努力不会获得任何分数。此外，正如罗纳德·里根（Ronald Reagan）告诫的那样：“据说辛勤工作从未杀死任何人，但我说为什么要抓住机会？”The Family Jewels and How We Increase Your Share of These Gems家庭珠宝以及我们如何增加您在这些宝石中的份额On page A-1 we list Berkshire’s subsidiaries, a smorgasbord of businesses employing 360,000 at yearend. You can read much more about these controlled operations in the 10-K that fills the back part of this report. Our major positions in companies that we partly own and don’t control are listed on page 7 of this letter. That portfolio of businesses, too, is large and diverse.在A-1页上，我们列出了伯克希尔的子公司，这是一家年末雇用360,000名员工的大型企业。您可以在本报告后半部分的10-K中阅读有关这些受控操作的更多信息。这封信的第7页列出了我们在部分拥有和不受控制的公司中的主要职位。该业务组合也很大而且是多种多样的。Most of Berkshire’s value, however, resides in four businesses, three controlled and one in which we have only a 5.4% interest. All four are jewels.但是，伯克希尔哈撒韦公司的大部分价值都来自四项业务，其中三项受控，而其中一项仅占我们5.4％的权益。这四个都是珠宝。The largest in value is our property/casualty insurance operation, which for 53 years has been the core of Berkshire. Our family of insurers is unique in the insurance field. So, too, is its manager, Ajit Jain, who joined Berkshire in 1986.价值最大的是我们的财产/财产保险业务，该业务在53年以来一直是伯克希尔的核心业务。我们的保险公司家族在保险领域是独一无二的。它的经理Ajit Jain也是如此，他于1986年加入伯克希尔。Overall, the insurance fleet operates with far more capital than is deployed by any of its competitors worldwide. That financial strength, coupled with the huge flow of cash Berkshire annually receives from its non-insurance businesses, allows our insurance companies to safely follow an equity-heavy investment strategy not feasible for the overwhelming majority of insurers. Those competitors, for both regulatory and credit-rating reasons, must focus on bonds.总体而言，该保险公司的运营资本远远超过其全球任何竞争对手所部署的资本。这种财务实力，再加上伯克希尔每年从非保险业务中获得的大量现金流，使我们的保险公司能够安全地采取对绝大多数保险公司不可行的以股票为主的投资策略。出于监管和信用评级的原因，这些竞争对手必须将重点放在债券上。And bonds are not the place to be these days. Can you believe that the income recently available from a 10-year U.S. Treasury bond – the yield was 0.93% at yearend – had fallen 94% from the 15.8% yield available in September 1981? In certain large and important countries, such as Germany and Japan, investors earn a negative return on trillions of dollars of sovereign debt. Fixed-income investors worldwide – whether pension funds, insurance companies or retirees – face a bleak future.如今，债券已不再是地方。您是否可以相信，最近可从10年期美国国债获得的收入（年末收益率为0.93％）已经比1981年9月的15.8％下降了94％？在某些大型重要国家，例如德国和日本，投资者从数万亿美元的主权债务中获得负收益。全世界的固定收益投资者（无论是养老基金，保险公司还是退休人员）都面临着黯淡的未来。Some insurers, as well as other bond investors, may try to juice the pathetic returns now available by shifting their purchases to obligations backed by shaky borrowers. Risky loans, however, are not the answer to inadequate interest rates. Three decades ago, the once-mighty savings and loan industry destroyed itself, partly by ignoring that maxim.一些保险公司以及其他债券投资者可能会尝试通过将购买的产品转移到由摇摇欲坠的借款人支持的债务中来获取可悲的回报。但是，高风险贷款并不是解决利率不足的答案。三十年前，曾经强大的储蓄和贷款行业摧毁了自己，部分原因是无视这一准则。Berkshire now enjoys $138 billion of insurance “float” – funds that do not belong to us, but are nevertheless ours to deploy, whether in bonds, stocks or cash equivalents such as U.S. Treasury bills. Float has some similarities to bank deposits: cash flows in and out daily to insurers, with the total they hold changing very little. The massive sum held by Berkshire is likely to remain near its present level for many years and, on a cumulative basis, has been costless to us. That happy result, of course, could change – but, over time, I like our odds.伯克希尔现在享有1,380亿美元的保险“流通量”，这些资金不属于我们，但仍然属于我们的部署范围，无论是债券，股票还是现金等价物（例如美国国库券）。浮存金与银行存款有一些相似之处：每天流入和流出保险公司的现金流量，其持有的总额变化很小。伯克希尔哈撒韦所持有的巨额资金很可能多年来仍将保持在目前水平附近，并且从累积的角度来看，对我们来说是无价的。当然，这种快乐的结果可能会改变-但是随着时间的流逝，我喜欢我们的赔率。I have repetitiously – some might say endlessly – explained our insurance operation in my annual letters to you. Therefore, I will this year ask new shareholders who wish to learn more about our insurance business and “float” to read the pertinent section of the 2019 report, reprinted on page A-2. It’s important that you understand the risks, as well as the opportunities, existing in our insurance activities.我反复（有时可能会不停地说）在我给您的年度信函中解释了我们的保险业务。因此，我今年将请希望进一步了解我们的保险业务并“浮动”的新股东阅读A-2页上转载的2019年报告的相关部分。了解您的保险活动中存在的风险和机遇非常重要。Our second and third most valuable assets – it’s pretty much a toss-up at this point – are Berkshire’s 100% ownership of BNSF, America’s largest railroad measured by freight volume, and our 5.4% ownership of Apple. And in the fourth spot is our 91% ownership of Berkshire Hathaway Energy (“BHE”). What we have here is a very unusual utility business, whose annual earnings have grown from $122 million to $3.4 billion during our 21 years of ownership.我们第二，第三高价值的资产（目前几乎是一笔交易）是伯克希尔拥有BNSF的100％所有权，这是按货运量衡量的美国最大铁路，以及我们拥有5.4％的苹果。排在第四位的是伯克希尔·哈撒韦能源（“ BHE”）的91％所有权。我们拥有的是一家非常不寻常的公用事业公司，在我们拥有的21年中，其年收入从1.22亿美元增长至34亿美元。I’ll have more to say about BNSF and BHE later in this letter. For now, however, I would like to focus on a practice Berkshire will periodically use to enhance your interest in both its “Big Four” as well as the many other assets Berkshire owns.在这封信的后面，我将对BNSF和BHE进行更多讨论。但是，就目前而言，我想重点介绍一下伯克希尔将定期使用的一种做法，以增强您对它的“四大”以及伯克希尔拥有的许多其他资产的兴趣。* * * * * * * * * * * *Last year we demonstrated our enthusiasm for Berkshire’s spread of properties by repurchasing the equivalent of 80,998 “A” shares, spending $24.7 billion in the process. That action increased your ownership in all of Berkshire’s businesses by 5.2% without requiring you to so much as touch your wallet.去年，我们回购了80,998股“ A”股，并花费247亿美元，显示了我们对伯克希尔·哈撒韦遍及房地产的热情。这一举动使您在伯克希尔所有业务中的所有权增加了5.2％，而无需您花太多钱就能摸到钱包。Following criteria Charlie and I have long recommended, we made those purchases because we believed they would both enhance the intrinsic value per share for continuing shareholders and would leave Berkshire with more than ample funds for any opportunities or problems it might encounter.遵循查理和我长期以来一直建议的标准，我们进行了这些购买，因为我们相信它们既可以提高持续股东的每股内在价值，又可以使伯克希尔拥有足够的资金来应对可能遇到的任何机会或问题。In no way do we think that Berkshire shares should be repurchased at simply any price. I emphasize that point because American CEOs have an embarrassing record of devoting more company funds to repurchases when prices have risen than when they have tanked. Our approach is exactly the reverse.我们绝不认为应该以任何价格回购伯克希尔股票。我强调这一点是因为美国CEO的尴尬记录是，在价格上涨时而不是在股价下跌时，将更多的公司资金用于回购。我们的方法恰恰相反。Berkshire’s investment in Apple vividly illustrates the power of repurchases. We began buying Apple stock late in 2016 and by early July 2018, owned slightly more than one billion Apple shares (split-adjusted). Saying that, I’m referencing the investment held in Berkshire’s general account and am excluding a very small and separately-managed holding of Apple shares that was subsequently sold. When we finished our purchases in mid-2018, Berkshire’s general account owned 5.2% of Apple.伯克希尔对苹果的投资生动地说明了回购的力量。我们于2016年末开始购买苹果股票，到2018年7月初，拥有略超过10亿苹果股票（分拆后）。话虽如此，我指的是在伯克希尔·哈撒韦公司普通账户中持有的投资，但不包括随后出售的非常小的单独管理的苹果股票。当我们在2018年中期完成购买时，伯克希尔哈撒韦的普通账户拥有苹果5.2％的股份。Our cost for that stake was $36 billion. Since then, we have both enjoyed regular dividends, averaging about $775 million annually, and have also – in 2020 – pocketed an additional $11 billion by selling a small portion of our position.我们所持股份的成本为360亿美元。从那时起，我们俩都享有定期股息，平均每年7.75亿美元，并且在2020年，通过出售我们一小部分头寸，还可额外赚得110亿美元。Despite that sale – voila! – Berkshire now owns 5.4% of Apple. That increase was costless to us, coming about because Apple has continuously repurchased its shares, thereby substantially shrinking the number it now has outstanding.尽管有特价–瞧！ –伯克希尔现在拥有苹果5.4％的股份。涨价对我们来说是无价的，这是因为苹果不断回购股票，从而大大减少了现在流通在外的股票数量。But that’s far from all of the good news. Because we also repurchased Berkshire shares during the 21¤2 years,但这远不是所有的好消息。因为我们也在21年2年内回购了伯克希尔股票，you now indirectly own a full 10% more of Apple’s assets and future earnings than you did in July 2018.与2018年7月相比，您现在间接拥有Apple资产和未来收益的10％以上。This agreeable dynamic continues. Berkshire has repurchased more shares since yearend and is likely to further reduce its share count in the future. Apple has publicly stated an intention to repurchase its shares as well. As these reductions occur, Berkshire shareholders will not only own a greater interest in our insurance group and in BNSF and BHE, but will also find their indirect ownership of Apple increasing as well.这种令人愉快的动态仍在继续。自年底以来，伯克希尔哈撒韦公司回购了更多股票，并且将来可能会进一步减少其股票数量。苹果已经公开表示有意回购其股票。随着这些减少的发生，伯克希尔股东不仅将对我们的保险集团，BNSF和BHE拥有更大的利益，而且还将发现他们对苹果的间接所有权也在增加。The math of repurchases grinds away slowly, but can be powerful over time. The process offers a simple way for investors to own an ever-expanding portion of exceptional businesses.回购的数学原理慢慢消失了，但是随着时间的流逝，它会变得强大起来。该过程为投资者提供了一种简单的方式，使其拥有不断扩大的特殊业务部分。And as a sultry Mae West assured us: “Too much of a good thing can be . . . wonderful.”梅·韦斯特（Mae West）闷闷不乐地向我们保证：“好事太多会。 。 。精彩的。”Investments投资项目点击查看：2020年下部分双语译文内容 往期巴菲特致股东的信 使用双语译文翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。
    2021-03-01 16:25:43
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  • 巴菲特致股东的封（2020）上
    BERKSHIRE HATHAWAY INC.伯克希尔·哈撒韦公司To the Shareholders of Berkshire Hathaway Inc.:致伯克希尔·哈撒韦公司（Berkshire Hathaway Inc.）的股东：Berkshire earned $42.5 billion in 2020 according to generally accepted accounting principles (commonly called “GAAP”). The four components of that figure are $21.9 billion of operating earnings, $4.9 billion of realized capital gains, a $26.7 billion gain from an increase in the amount of net unrealized capital gains that exist in the stocks we hold and, finally, an $11 billion loss from a write-down in the value of a few subsidiary and affiliate businesses that we own. All items are stated on an after-tax basis.根据公认的会计原则（通常称为“ GAAP”），伯克希尔2020年的收入为425亿美元。该数字的四个组成部分是219亿美元的营业收入，49亿美元的已实现资本收益，267亿美元的收益来自我们所持股票中存在的未实现资本净收益的增加，最后是110亿美元的亏损减记我们拥有的一些子公司和联属企业的价值。所有项目均以税后基础列示。Operating earnings are what count most, even during periods when they are not the largest item in our GAAP total. Our focus at Berkshire is both to increase this segment of our income and to acquire large and favorably-situated businesses. Last year, however, we met neither goal: Berkshire made no sizable acquisitions and operating earnings fell 9%. We did, though, increase Berkshire’s per-share intrinsic value by both retaining earnings and repurchasing about 5% of our shares.营业收入是最重要的，即使它们不是我们GAAP总额中最大的时期也是如此。我们在伯克希尔的重点既是增加收入的这一部分，又是收购位置优越的大型企业。但是，去年，我们没有实现任何目标：伯克希尔没有进行任何大规模的收购，营业利润下降了9％。不过，我们确实通过保留收益和回购了大约5％的股份来提高了伯克希尔哈撒韦的每股内在价值。The two GAAP components pertaining to capital gains or losses (whether realized or unrealized) fluctuate capriciously from year to year, reflecting swings in the stock market. Whatever today’s figures, Charlie Munger, my long-time partner, and I firmly believe that, over time, Berkshire’s capital gains from its investment holdings will be substantial.与资本损益（已变现或未变现）有关的两个GAAP成分每年都在反复波动，反映了股票市场的波动。无论今天的数据如何，我的长期合伙人查理·芒格（Charlie Munger）都坚信，随着时间的流逝，伯克希尔从其投资中获得的资本收益将是可观的。As I’ve emphasized many times, Charlie and I view Berkshire’s holdings of marketable stocks – at yearend worth $281 billion – as a collection of businesses. We don’t control the operations of those companies, but we do share proportionately in their long-term prosperity. From an accounting standpoint, however, our portion of their earnings is not included in Berkshire’s income. Instead, only what these investees pay us in dividends is recorded on our books. Under GAAP, the huge sums that investees retain on our behalf become invisible.正如我多次强调的那样，查理和我将伯克希尔·哈撒韦持有的有价股票（截至年底价值2810亿美元）视为一系列业务。我们无法控制这些公司的运营，但我们会按比例分享其长期繁荣。但是，从会计角度来看，我们的部分收入未计入伯克希尔的收入。取而代之的是，只有这些被投资方向我们支付的股利才被记录在我们的账簿上。根据GAAP，被投资方代表我们保留的巨额资金变得无形。What’s out of sight, however, should not be out of mind: Those unrecorded retained earnings are usually building value – lots of value – for Berkshire. Investees use the withheld funds to expand their business, make acquisitions, pay off debt and, often, to repurchase their stock (an act that increases our share of their future earnings). As we pointed out in these pages last year, retained earnings have propelled American business throughout our country’s history. What worked for Carnegie and Rockefeller has, over the years, worked its magic for millions of shareholders as well.但是，不应该忘记什么：伯克希尔未记录的未分配利润通常是伯克希尔创造价值（很多价值）。被投资方使用预扣资金来扩大业务，进行收购，偿还债务，并经常回购股票（此举增加了我们在未来收益中所占的比重）。正如我们在去年的这些页面中所指出的那样，留存收益在整个美国历史上一直推动着美国业务的发展。多年来，为卡内基和洛克菲勒工作的公司也为数百万的股东发挥了魔力。Of course, some of our investees will disappoint, adding little, if anything, to the value of their company by retaining earnings. But others will over-deliver, a few spectacularly. In aggregate, we expect our share of the huge pile of earnings retained by Berkshire’s non-controlled businesses (what others would label our equity portfolio) to eventually deliver us an equal or greater amount of capital gains. Over our 56-year tenure, that expectation has been met.当然，我们的一些被投资人会失望的，通过保留收益来增加公司价值（如果有的话）。但是其他一些人则会超额投放。总体而言，我们预计伯克希尔哈撒韦非控制业务（其他将其标记为股票投资组合）所保留的巨额利润中所占的份额最终将为我们带来相等或更多的资本收益。在我们56年的任期内，这一期望已得到满足。The final component in our GAAP figure – that ugly $11 billion write-down – is almost entirely the quantification of a mistake I made in 2016. That year, Berkshire purchased Precision Castparts (“PCC”), and I paid too much for the company.GAAP数据的最终组成部分-丑陋的110亿美元减记-几乎完全是我在2016年犯下的错误的量化指标。那一年，伯克希尔购买了Precision Castparts（“ PCC”），而我为公司付出了太多。No one misled me in any way – I was simply too optimistic about PCC’s normalized profit potential. Last year, my miscalculation was laid bare by adverse developments throughout the aerospace industry, PCC’s most important source of customers.没有人以任何方式误导我-我对PCC的正常化的利润潜力过于乐观。去年，我的错误估计被整个航空航天业（PCC最重要的客户来源）的不利发展所掩盖。In purchasing PCC, Berkshire bought a fine company – the best in its business. Mark Donegan, PCC’s CEO, is a passionate manager who consistently pours the same energy into the business that he did before we purchased it. We are lucky to have him running things.在收购PCC方面，伯克希尔哈撒韦公司收购了一家优秀公司-这是其业务中最好的。 PCC的首席执行官Mark Donegan是一位充满激情的经理，他一如既往地将自己的精力投入到我们收购该公司之前所做的工作中。我们很幸运能让他管理事情。I believe I was right in concluding that PCC would, over time, earn good returns on the net tangible assets deployed in its operations. I was wrong, however, in judging the average amount of future earnings and, consequently, wrong in my calculation of the proper price to pay for the business.我相信我的结论是正确的，即PCC将随着时间的推移，从其运营中部署的净有形资产中获得丰厚的回报。但是，在判断平均未来收入金额时，我是错误的，因此，在计算支付业务所需的适当价格时，我是错误的。PCC is far from my first error of that sort. But it’s a big one.PCC远非我犯的第一个那种错误。但这是一个大问题 Two Strings to Our Bow弓的两根弦Berkshire is often labeled a conglomerate, a negative term applied to holding companies that own a hodge-podge of unrelated businesses. And, yes, that describes Berkshire – but only in part. To understand how and why we differ from the prototype conglomerate, let’s review a little history.伯克希尔哈撒韦通常被称为集团公司，这是一个负称，适用于拥有不相关业务杂货店的控股公司。而且，是的，它描述了伯克希尔·哈撒韦公司，但仅部分描述了这一点。要了解我们与原型企业集团之间的区别和原因，让我们回顾一下历史。Over time, conglomerates have generally limited themselves to buying businesses in their entirety. That strategy, however, came with two major problems. One was unsolvable: Most of the truly great businesses had no interest in having anyone take them over. Consequently, deal-hungry conglomerateurs had to focus on so-so companies that lacked important and durable competitive strengths. That was not a great pond in which to fish.随着时间的流逝，企业集团通常将自己局限于购买全部业务。但是，该策略存在两个主要问题。一个是无法解决的：大多数真正伟大的企业对让任何人接管它们都没有兴趣。因此，渴望交易的企业集团必须专注于缺乏重要而持久的竞争优势的马马虎虎的公司。那不是一个可以钓鱼的好池塘。Beyond that, as conglomerateurs dipped into this universe of mediocre businesses, they often found themselves required to pay staggering “control” premiums to snare their quarry. Aspiring conglomerateurs knew the answer to this “overpayment” problem: They simply needed to manufacture a vastly overvalued stock of their own that could be used as a “currency” for pricey acquisitions. (“I’ll pay you $10,000 for your dog by giving you two of my $5,000 cats.”)除此之外，随着大企业集团进入平庸的业务领域，他们常常发现自己需要支付惊人的“控制”保费来圈养他们的采石场。有抱负的企业集团知道这个“超额支付”问题的答案：他们只需要制造自己的大量被高估的股票，就可以将其用作高价收购的“货币”。 （“我会给我5,000美元的猫中的两只，为您的狗支付10,000美元。”）Often, the tools for fostering the overvaluation of a conglomerate’s stock involved promotional techniques and “imaginative” accounting maneuvers that were, at best, deceptive and that sometimes crossed the line into fraud. When these tricks were “successful,” the conglomerate pushed its own stock to, say, 3x its business value in order to offer the target 2x its value.通常，助长集团股价高估的工具包括促销技巧和“富有想象力的”会计手段，这些手段充其量是欺骗性的，有时甚至会越过欺诈行为。当这些技巧“成功”时，这家企业集团将自己的股票推高到其业务价值的3倍，以使目标股价达到其价值的2倍。Investing illusions can continue for a surprisingly long time. Wall Street loves the fees that deal-making generates, and the press loves the stories that colorful promoters provide. At a point, also, the soaring price of a promoted stock can itself become the “proof” that an illusion is reality.投资幻想可能会持续很长时间。华尔街喜欢交易产生的费用，而媒体则喜欢丰富多彩的发起人提供的故事。同样，在某种程度上，经过提升的股票的飞涨价格本身也可以成为幻想成为现实的“证据”。Eventually, of course, the party ends, and many business “emperors” are found to have no clothes. Financial history is replete with the names of famous conglomerateurs who were initially lionized as business geniuses by journalists, analysts and investment bankers, but whose creations ended up as business junkyards.最终，当然，聚会结束了，发现许多商业“皇帝”没有衣服。金融历史上充斥着着名的企业集团的名字，这些企业集团最初被新闻记者，分析师和投资银行家誉为商业天才，但后来被创造为商业垃圾场。Conglomerates earned their terrible reputation.大型企业赢得了可怕的声誉。* * * * * * * * * * * *Charlie and I want our conglomerate to own all or part of a diverse group of businesses with good economic characteristics and good managers. Whether Berkshire controls these businesses, however, is unimportant to us.我和查理（Charlie）和我希望我们的集团拥有拥有良好经济特征和优秀管理者的多元化企业中的全部或部分。然而，伯克希尔是否控制这些业务对我们而言并不重要。It took me a while to wise up. But Charlie – and also my 20-year struggle with the textile operation I inherited at Berkshire – finally convinced me that owning a non-controlling portion of a wonderful business is more profitable, more enjoyable and far less work than struggling with 100% of a marginal enterprise.我花了一些时间才明智。但是查理–以及我在伯克希尔继承的纺织业务20年的挣扎–最终说服了我，拥有一家出色企业的非控股部分比挣扎100％的股权更赚钱，更愉快，工作更少。边缘企业。For those reasons, our conglomerate will remain a collection of controlled and non-controlled businesses. Charlie and I will simply deploy your capital into whatever we believe makes the most sense, based on a company’s durable competitive strengths, the capabilities and character of its management, and price.出于这些原因，我们的企业集团将仍然是受控和非受控业务的集合。查理和我将根据公司的持久竞争力，管理能力和价格以及价格，将您的资金投入我们认为最有意义的领域。点击查看：剩下部分双语译文 往期巴菲特致股东的信 使用双语译文翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。
    2021-03-01 16:25:37
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  • 巴菲特致股东的封（2020）3/5
    点击查看上部分内容Below we list our fifteen common stock investments that at yearend were our largest in market value. We exclude our Kraft Heinz holding — 325,442,152 shares — because Berkshire is part of a control group and therefore must account for that investment using the “equity” method. On its balance sheet, Berkshire carries the Kraft Heinz holding at a GAAP figure of $13.3 billion, an amount that represents Berkshire’s share of the audited net worth of Kraft Heinz on December 31, 2020. Please note, though, that the market value of our shares on that date was only下面我们列出了15种普通股投资，这些投资在年底时是我们市值最大的。我们将卡夫亨氏（325,442,152股）的股份排除在外，因为伯克希尔哈撒韦是控制组的一部分，因此必须使用“权益”法核算该投资。在其资产负债表上，伯克希尔持有的卡夫亨氏按公认会计原则计算的金额为133亿美元，该金额代表伯克希尔在2020年12月31日经审计的卡夫亨氏净资产中所占的份额。但是请注意，我们的市值该日期的股份仅为113亿美元。 *Excludes shares held by pension funds of Berkshire subsidiaries.*不包括伯克希尔哈撒韦公司子公司的养老基金所持股份。**This is our actual purchase price and also our tax basis.**这是我们的实际购买价格，也是我们的税基。***Includes a $10 billion investment in Occidental Petroleum, consisting of preferred stock and warrants to buy common stock, a combination now being valued at $9 billion.***包括对西方石油（Occidental Petroleum）的100亿美元投资，包括优先股和购买普通股的认股权证，目前合并后的价值为90亿美元。 A Tale of Two Cities双城记Success stories abound throughout America. Since our country’s birth, individuals with an idea, ambition and often just a pittance of capital have succeeded beyond their dreams by creating something new or by improving the customer’s experience with something old.在美国各地，成功的故事比比皆是。自从我们国家诞生以来，有想法，雄心勃勃且常常只有少量资金的个人已经通过创造新的事物或通过改善旧事物的客户体验来超越自己的梦想而取得了成功。Charlie and I journeyed throughout the nation to join with many of these individuals or their families. On the West Coast, we began the routine in 1972 with our purchase of See’s Candy. A full century ago, Mary See set out to deliver an age-old product that she had reinvented with special recipes. Added to her business plan were quaint stores staffed by friendly salespeople. Her first small outlet in Los Angeles eventually led to several hundred shops, spread throughout the West.我和查理（Charlie）遍及全国，与其中许多人或他们的家人在一起。在西海岸，我们从1972年购买See’s Candy开始了日常活动。整整一个世纪以前，玛丽·西（Mary See）着手提供一种经过特殊配方重新发明的古老产品。她的商业计划中还增加了由友好的销售人员组成的古朴商店。她在洛杉矶的第一个小商店最终导致了数百家商店，遍布整个西部。Today, Mrs. See’s creations continue to delight customers while providing life-long employment for thousands of women and men. Berkshire’s job is simply not to meddle with the company’s success. When a business manufactures and distributes a non-essential consumer product, the customer is the boss. And, after 100 years, the customer’s message to Berkshire remains clear: “Don’t mess with my candy.” (The website is https://www.sees.com/; try the peanut brittle.)时至今日，See太太的作品在继续为顾客带来欢乐的同时，为成千上万的男女提供了终身就业机会。伯克希尔的工作根本不在于干涉公司的成功。当企业生产和分销非必要的消费产品时，客户就是老板。而且，在100年之后，客户向伯克希尔公司传达的信息仍然很明确：“别惹我的糖果。” （该网站为https://www.sees.com/；尝试花生糖。）Let’s move across the continent to Washington, D.C. In 1936, Leo Goodwin, along with his wife, Lillian, became convinced that auto insurance – a standardized product customarily purchased from agents – could be sold directly at a much lower price. Armed with $100,000, the pair took on giant insurers possessing 1,000 times or more their capital. Government Employees Insurance Company (later shortened to GEICO) was on its way.让我们穿越整个大陆到华盛顿特区。1936年，利奥·古德温（Leo Goodwin）和他的妻子莉莉安（Lillian）坚信，汽车保险（一种通常从代理商那里购买的标准化产品）可以直接以低得多的价格出售。两人手持10万美元资产，收购了拥有1,000倍或更多资本的大型保险公司。政府雇员保险公司（后简称为GEICO）即将到来。By luck, I was exposed to the company’s potential a full 70 years ago. It instantly became my first love (of an investment sort). You know the rest of the story: Berkshire eventually became the 100% owner of GEICO, which at 84 years of age is constantly fine-tuning – but not changing – the vision of Leo and Lillian.幸运的是，整整70年前，我就接触到了公司的潜力。它立即成为了我的初恋（一种投资）。您还可以了解故事的其余部分：伯克希尔最终成为GEICO的100％拥有者，GEICO在84岁时就不断调整，但并没有改变Leo和Lillian的愿景。There has been, however, a change in the company’s size. In 1937, its first full year of operation, GEICO did $238,288 of business. Last year the figure was $35 billion.但是，公司规模发生了变化。在1937年，即运营的第一个整年，GEICO做了 238,288美元的业务。去年这个数字是350亿美元。* * * * * * * * * * * *Today, with much of finance, media, government and tech located in coastal areas, it’s easy to overlook the many miracles occurring in middle America. Let’s focus on two communities that provide stunning illustrations of the talent and ambition existing throughout our country.如今，由于许多金融，媒体，政府和技术都位于沿海地区，因此很容易忽略了中美洲发生的许多奇迹。让我们集中讨论两个社区，这些社区提供了令人惊叹的全国各地才干和抱负的例证。You will not be surprised that I begin with Omaha.我从奥马哈开始，您不会感到惊讶。In 1940, Jack Ringwalt, a graduate of Omaha’s Central High School (the alma mater as well of Charlie, my dad, my first wife, our three children and two grandchildren), decided to start a property/casualty insurance company funded by $125,000 in capital.1940年，杰克·林格沃尔特（Jack Ringwalt）毕业于奥马哈中央高中（母校还有查理，我的父亲，我的第一任妻子，我们的三个孩子和两个孙子），决定成立一家财产/伤亡保险公司，资金由125,000美元首都。Jack’s dream was preposterous, requiring his pipsqueak operation – somewhat pompously christened as National Indemnity – to compete with giant insurers, all of which operated with abundant capital. Additionally, those competitors were solidly entrenched with nationwide networks of well-funded and long-established local agents. Under Jack’s plan, National Indemnity, unlike GEICO, would itself use whatever agencies deigned to accept it and consequently enjoy no cost advantage in its acquisition of business. To overcome those formidable handicaps, National Indemnity focused on “odd-ball” risks, which were deemed unimportant by the “big boys.” And, improbably, the strategy succeeded.杰克的梦想是荒谬的，要求他的点名操作-有时被戏称为“国家赔偿”-与大型保险公司竞争，所有保险公司都拥有雄厚的资金。此外，这些竞争对手在全国范围内拥有雄厚资金和长期建立的本地代理商网络，因此根深蒂固。根据杰克的计划，与GEICO不同，National Indemnity（国家赔偿）本身将使用任何指定接受它的代理机构，因此在收购业务中不享有成本优势。为了克服这些巨大的障碍，国家赔偿局将重点放在“奇数”风险上，这些风险被“大男孩”认为不重要。而且，该策略不可能成功。Jack was honest, shrewd, likeable and a bit quirky. In particular, he disliked regulators. When he periodically became annoyed with their supervision, he would feel an urge to sell his company.杰克很诚实，机灵，讨人喜欢并且有点古怪。特别是，他不喜欢监管机构。当他定期因他们的监督而烦恼时，他会感到有出售公司的冲动。Fortunately, I was nearby on one of those occasions. Jack liked the idea of joining Berkshire, and we made a deal in 1967, taking all of 15 minutes to reach a handshake. I never asked for an audit.幸运的是，在其中一种情况下，我就在附近。杰克喜欢加入伯克希尔的想法，我们在1967年达成了一项协议，花了整整15分钟的时间达成了握手协议。我从来没有要求审核。Today National Indemnity is the only company in the world prepared to insure certain giant risks. And, yes, it remains based in Omaha, a few miles from Berkshire’s home office.如今，National Indemnity是世界上唯一一家为某些巨额风险提供保险的公司。而且，是的，它仍然位于奥马哈，距伯克希尔哈撒韦公司的家庭办公室只有几英里。Over the years, we have purchased four additional businesses from Omaha families, the best known among them being Nebraska Furniture Mart (“NFM”). The company’s founder, Rose Blumkin (“Mrs. B”), arrived in Seattle in 1915 as a Russian emigrant, unable to read or speak English. She settled in Omaha several years later and by 1936 had saved $2,500 with which to start a furniture store.多年来，我们从奥马哈家族购买了另外四家企业，其中最知名的是内布拉斯加州家具市场（“ NFM”）。该公司的创始人Rose Blumkin（“ B太太”）于1915年作为俄罗斯移民来到西雅图，无法阅读或说英语。几年后，她在奥马哈定居，到1936年，她已节省了2500美元，用于开设一家家具店。Competitors and suppliers ignored her, and for a time their judgment seemed correct: World War II stalled her business, and at yearend 1946, the company’s net worth had grown to only $72,264. Cash, both in the till and on deposit, totaled $50 (that’s not a typo).竞争对手和供应商不理her她，有一段时间他们的判断似乎是正确的：第二次世界大战使她的生意停滞了，到1946年年底，该公司的净资产仅增长到72,264美元。收银机和存款机上的现金总计为50美元（这不是拼写错误）。One invaluable asset, however, went unrecorded in the 1946 figures: Louie Blumkin, Mrs. B’s only son, had rejoined the store after four years in the U.S. Army. Louie fought at Normandy’s Omaha Beach following the D-Day invasion, earned a Purple Heart for injuries sustained in the Battle of the Bulge, and finally sailed home in November 1945.但是，1946年的数据中没有记录一项宝贵的资产：B太太的独子Louie Blumkin在美国陆军服役四年后重新加入了这家商店。路易威登号（D-Day）入侵后，路易（Louie）在诺曼底（Normandy）的奥马哈海滩（Omaha Beach）进行了战斗，因在the突之战中受伤而赢得紫心勋章，并最终于1945年11月驶回家。Once Mrs. B and Louie were reunited, there was no stopping NFM. Driven by their dream, mother and son worked days, nights and weekends. The result was a retailing miracle.一旦B太太和路易（Louie）团聚，就不会停止NFM。在梦想的驱使下，母子俩白天，晚上和周末都在工作。结果就是零售奇迹。By 1983, the pair had created a business worth $60 million. That year, on my birthday, Berkshire purchased 80% of NFM, again without an audit. I counted on Blumkin family members to run the business; the third and fourth generation do so today. Mrs. B, it should be noted, worked daily until she was 103 – a ridiculously premature retirement age as judged by Charlie and me.到1983年，两人创造了价值6000万美元的业务。那年，在我的生日那天，伯克希尔再次购买了NFM的80％，而又未经审核。我指望布鲁姆金（Blumkin）家族成员经营这家公司。第三代和第四代今天也这样做。应该指出的是，B夫人每天工作直到她103岁，这是我和查理（Charlie and我）判断的离退休年龄都荒唐的时代。NFM now owns the three largest home-furnishings stores in the U.S. Each set a sales record in 2020, a feat achieved despite the closing of NFM’s stores for more than six weeks because of COVID-19.NFM现在拥有美国三大家居用品商店。每家都创下了2020年的销售记录，尽管由于COVID-19而关闭了NFM的商店超过六周，这仍然是一项壮举。A post-script to this story says it all: When Mrs. B’s large family gathered for holiday meals, she always asked that they sing a song before eating. Her selection never varied: Irving Berlin’s “God Bless America.”这个故事的后记说明了这一切：当B太太的大家庭聚集在一起度假时，她总是要求他们在吃饭前唱一首歌。她的选择从未改变：欧文·柏林（Erving Berlin）的“上帝保佑美国”。ng Berlin）的“上帝保佑美国”。* * * * * * * * * * * *Let’s move somewhat east to Knoxville, the third largest city in Tennessee. There, Berkshire has ownership in two remarkable companies – Clayton Homes (100% owned) and Pilot Travel Centers (38% owned now, but headed for 80% in 2023).让我们稍微向东移动到田纳西州的第三大城市诺克斯维尔。伯克希尔哈撒韦公司在那儿拥有两家出色的公司的所有权-克莱顿住宅公司（拥有100％的股份）和飞行员旅行中心（目前拥有38％的股份，但到2023年将达到80％）。点击查看：2020年下部分双语译文内容(明日更新) 往期巴菲特致股东的信 使用双语译文翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。
    2021-03-01 16:25:09
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  • 糖尿病患者的功能障碍、代谢和心血管健康：研究治疗新方向
    查看上部分内容已有研究表明，脂质和支链氨基酸（BCAAs）在引起T2DM中胰岛素抵抗方面可能具有协同作用，但对它们对β细胞功能的影响知之甚少[ 127 ]。几个研究已经报道在肥胖和2型糖尿病[升高的血浆支链氨基酸128，129 ]。据报道，在啮齿动物中，BCAAs刺激胰岛素分泌并激活mTORC1，这与β细胞的质量和功能有关[ 130 ]。mTORC1的是自噬的负调节[ 131 ]，和热量限制调制自噬，该过程已知调节脂质代谢[ 132，133，134，135]。有矛盾的报告，以人减肥后的BCAA水平的变化是否与本身或糖尿病状态[减肥134，135 ]。生长和分化因子15（GDF-15）涉及营养应激，并且在T2DM和CVD [升高136，137 ]。此外，成纤维细胞生长因子21（FGF-21）由肝脏分泌，并在胰腺中高表达。FGF-21强烈与肥胖症和2型糖尿病脂质和葡萄糖代谢[的调节器相关联138，139，140 ]。它选择性促进脂肪细胞中的葡萄糖摄取，从而促进TG存储在脂肪细胞和脂肪酸氧化在其它组织中[补充瘦素和脂联素的功能140，141，142]。FGF-21水平在2型糖尿病患者，可能暗示其功能[电阻117，138，143 ]。在啮齿动物中，FGF-21能刺激脂联素，其表现出神经酰胺酶活性，降解毒性神经酰胺和提高胰岛素敏感性[ 144，145，146 ]。此外，据报道FGF-21的肝表达，以增强细胞过程，导致脂肪组织[褐化147，148 ]。值得注意的是，褐色脂肪组织通过葡萄糖和脂质的氧化而有助于调节身体的新陈代谢和能量消耗，在女性中更为丰富[ 149]。此外，已经表明，在肥胖症中，FGF-21使VLDL-TG的吸收从白色脂肪组织转移到棕色脂肪组织[ 150 ]。有趣的是，发现FGF-21通过加速由CD36和LPL功能介导的脂肪组织摄取来调节小鼠肝脏VLDL-TG的分泌[ 150 ]。对细胞应激和分化的通用生物标记物的鉴定。将理解β细胞衰竭和在T2DM恢复的基本机制中的光的缺乏的β细胞特异性标志物功能障碍[有用136，138，139 ]。需要进一步的工作来了解GDF-15，FGF-21和BCAA与人类脂质代谢和β细胞功能有关的确切功能。6.胰腺内脂肪和胰腺形态尽管胰腺是糖尿病最重要的器官，但对它的研究仍然有限。胰腺的临床和观察研究自然集中在胰岛功能本身，而是腺泡细胞的内分泌功能相关性很少被认为是[ 151，152，153，154 ]。胰腺体积小在T2DM，与胰腺边界[显着不规则性155，156 ]。腺泡细胞质量反映了胰岛的总体积，胰岛和导管系统贡献了约5％。此外，胰腺的脂肪含量中度升高在T2DM [ 25，27，157 ]，胰腺体积负相关[155 ]。最近，我们已经证实，胰腺内脂肪含量的正常化可通过最大β细胞容量的正常化恢复β细胞功能[ 158 ]。T2DM患者的死后胰腺研究表明，外分泌组织的纤维化与β细胞减少和α细胞质量增加有关[ 159 ]。在ZDF大鼠，脂肪替代腺泡细胞的发展成纤维化[ 160 ]，可能导致胰岛和β细胞功能障碍[破坏153，160，161，162 ]。此外，衰老过程中老鼠的腺泡细胞转分化为脂肪细胞，这是通过c-Myc转录因子的表达调控的[ 163]。这些报告的腺泡细胞变化是与β细胞功能丧失相关还是继发于β细胞功能丧失是一个重要的问题。在T2DM发生过程中胰岛素分泌不足可能解释了由于胰岛素对胰腺组织缺乏营养作用而导致的胰腺体积萎缩[ 164 ]。值得注意的是，胰腺体积是在人1型糖尿病（T1DM）小时胰岛素分泌不存在[ 165，166 ]。在高浓度的胰岛素例如经验丰富的营养作用由下列一餐胰腺组织可能是相当大的[ 164，167 ]。胰岛素样生长因子1（IGF-1）水平低在T1DM，老化，和T2DM [ 168，169，170，171 ]。IGF-1受体与胰岛素受体具有高度同源性，并且胰岛素与IGF-1受体的交叉反应性在高胰岛素浓度下引起组织生长作用。T2DM中腺泡细胞量的损失可能与IGF-1和胰岛素的缺乏有关。需要进一步研究潜在的分子机制，尤其是IGF-1和c-Myc的作用，以了解胰腺形态与T2DM发病机制的相关性。据报道，在具有T2DM的人类供体的腺泡细胞中脂质滴更常见[ 86 ]，而CD36脂肪酸转运蛋白的较高表达与胰岛素分泌不良有关[ 39 ]。最近，我们证明了T2DM的缓解和β细胞功能的恢复与胰腺形态的逐渐正常化有关（图3）[ 172 ]。去除多余脂肪后胰腺体积的增加表明，这可能是由于餐后胰岛素激增和其他因素引起的。胰腺组织的再生是已知的，这可以解释在糖尿病缓解期间观察到的胰腺体积增加[ 173]]。β细胞和腺泡细胞之间脂肪酸毒性作用的潜在机制是否相似尚需在人类中阐明。最终，这可以为维持β细胞功能并保持正常胰腺健康提供新策略。图3. 2型糖尿病缓解2年后胰腺形态和β细胞功能的恢复。代表应答者的胰腺形态的表面渲染图像（A），胰腺体积（B），分形维数（C）和最大胰岛素分泌（D），基线，5个月，12个月和24个月时与非糖尿病对照组相比。水平虚线表示非糖尿病对照的水平。与每个时间点的基线配对的数据表示为胰腺体积和分形维数的平均值（SD），以及胰岛素分泌的中位数（IQR）。*响应者与非糖尿病比较者组。†响应者vs基线。该图经《柳叶刀》杂志糖尿病和内分泌学[ 172 ]许可发表。7. T2DM的脂蛋白代谢和CVD风险患有T2DM面CVD的风险显着地增加，由于无序脂蛋白代谢[ 32，174，175 ]。历史上，动脉粥样硬化的风险归因于富含甘油三酸酯的VLDL的肝分泌增加，HDL胆固醇的减少以及致密的小LDL颗粒的增加[ 175 ]。然而，与传统使用的LDL胆固醇水平相比，ApoB被认为是确定CVD风险更有用的因素[ 176 ]。据报道，罹患T2DM的风险是由脂蛋白颗粒的大小决定的，而不是由脂质含量决定的，因此是由脂蛋白分泌和肝脏清除的动力学决定的[ 177]]。目前还增加了脂蛋白的影响（一），它被发现是心血管疾病[危险因素利息178，179 ]。载脂蛋白（载脂蛋白B / ApoE基因）是用于脂蛋白[装配和间隙重要50，180，181 ]。报道缺乏脂蛋白残余的清除可能与干扰经由载脂蛋白C-III [高肝表达的ApoB / ApoE基因受体的结合182，183 ]。但是，最近有报道说，ApoC-III可以促进LPL活性，而不受ApoE介导的脂蛋白清除的影响[ 184 ]。有矛盾的报告作为与ApoE的血浆水平是否可以预测CVD [ 185，186]。但是，应该认识到，并不是循环中的所有LDL颗粒都带有ApoE，因此ApoE的水平不一定反映整个脂蛋白群体的致动脉粥样硬化性质。载脂蛋白E基因和载脂蛋白C-III的多态性进行了报道，以增加发展中国家T2DM和心血管疾病，这需要进一步调查的风险[ 181，187 ]。此外，胰腺胰岛内ApoC-III的高表达导致小鼠β细胞衰竭[ 53 ]。因此，ApoC-III表达的下调可用作增强脂解，减少β细胞损伤和预防CVD风险的治疗靶标。女性有2型糖尿病的风险较低和心血管疾病比男性[ 13，14 ]。然而，一旦T2DM的发展，风险上升到男性[很高的水平188，189 ]。男性的VLDL-TG血浆水平高于女性[ 190 ]，表明肝脂蛋白输出和清除率存在差异。足够的皮下脂肪储存能力可能可以安全清除女性肝脏输出的脂肪。但是，一旦这些存储区发炎或达到最大容量以安全存储多余的脂肪，女性尤其容易受到过多脂质的损害。女性瘦素和脂联素的含量较高与这些标志物在发生T2DM和CVD中的保护性一致[ 17，113，149 ]。欧洲糖尿病研究协会（EASD）和欧洲心脏病学会（ESC）的最新指南建议使用他汀类药物降低男女T2DM患者的脂质分布并预防CVD死亡率，尽管男女之间的潜在差异突出显示[ 191 ]。8.减肥后T2DM的缓解机制减肥的研究强调了对β细胞功能的多余脂肪可能有害影响25，26，27 ]。在T2DM，肝脂蛋白出口与高胰内脂肪蓄积和β细胞功能[损失有关的26，27，43 ]。减少了肝和胰腺内脂肪是糖尿病缓解与去除此代谢应激[的后恢复功能的β细胞的能力最终依赖性的先决条件27，43 ]。此外，还发现体重的增加和缓解的丧失与肝脏VLDL-TG的产生和血浆VLDL-TG浓度的大幅增加有关（图2）。）。这些数据与被提出来解释T2DM [病因和可逆性的“双循环”的假设一致28，192。从肝脏输出的脂蛋白中已知对β细胞有毒的棕榈酸的这种特定富集与对β细胞功能障碍的致病作用一致。体重减轻，脂蛋白出口，和重量的稳定性的程度是主要的预测因子缓解[ 43，193 ]。还需要其他研究减肥后长期维持体重的分子机制的研究。脂肪和骨骼肌活组织检查的RNA测序表明，酰基肉碱可以决定减肥后的体重恢复[ 194]。这一结果与我们最近发现的体重减轻和失去缓解期间VLDL-TG内棕榈酸增加的发现是一致的[ 43 ]，也与CerS6依赖的C16：0神经酰胺对体重增加的调节功能相一致。小鼠[ 47 ]。总体而言，这些数据突出了未来治疗肥胖和T2DM的新颖方法。减肥手术长期以来可有效地使血糖正常化并实现T2DM的缓解[ 195 ]。我们已经表明，手术后糖尿病逆转的基本生理学与饮食减肥相同，并且与肝脏和胰腺中异位脂肪的去除有关[ 157 ]。的机制的一般相似性也已经报道由他人[ 196，197 ]。虽然在β细胞功能轻微改善手术后一周内发生，长期正常化需要更长的时间来从胰腺[去除多余油脂157，198]。手术后立即餐后胰高血糖素样肽1（GLP-1）的水平升高不太可能有助于观察到的空腹血浆葡萄糖快速正常化。这很可能是有关鉴于GLP-1水平没有饮食减肥后，尽管类似的血糖改善[更改手术程序本身，119，199 ]。与此相反，以下的膳食重量减轻的生长素释放肽的水平增加，但不肥胖治疗手术后[ 119，193，195 ]。两者合计，体重减轻后GLP-1和ghrelin均未引起糖尿病的缓解，这些激素水平的升高分别反映了对手术和饥饿影响的反调节机制。长期超负荷的营养导致β细胞的丧失分泌胰岛素的专业功能，去除脂毒性的环境会降低毒性脂质的吸收，恢复胰岛β细胞功能[ 22，28 ]。去除代谢应激以下体重减轻后β细胞功能的展示返回不与β细胞死亡或“细胞凋亡” [兼容10，24，98 ]。β细胞的再生是另一种过程，可以解释缓解后β细胞的恢复，据报道有些药物具有这种增殖作用。然而，β细胞复制或增殖的证据是缺乏成人[ 108，200，201]。适当的饮食对于DNL调节和代谢健康至关重要。包含碳水化合物的高电平的饮食是已知会增加DNL率，而生酮饮食具有相对的效果[ 202，203 ]。限制蛋氨酸的低热量饮食可延缓小鼠的糖尿病发展[ 204 ]。此外，限制BCAA可以改善小鼠和人类的代谢健康[ 205 ]。考虑到BCAA对β细胞的胰岛素分泌刺激作用[ 130 ]，在肥胖症和T2DM中观察到的高水平的BCAAs可能表明有害的长期作用或对其功能的抵抗性类似于肥胖症中FGF-21的作用[ 128，129，138 ]。最近有报道说，限制BCAA会加重生酮作用，并引起小鼠线粒体的氧化功能障碍[ 206 ]。从理论上讲，生酮饮食可能是一种有用的方法，可以燃烧多余的卡路里并通过细胞利用较少的能量，尽管随机对照试验仅显示了较小的影响[ 207 ]。但是，应该进行更多的研究来评估这种极端饮食的不良代谢影响，包括高循环NEFA及其潜在的脂毒性作用[ 203 ]。β细胞工作量假说也已经提出以解释在β细胞量功能障碍和下降在T2DM [ 64，208 ]。这主要是基于对肥胖症中β细胞增加胰岛素分泌的最终需求，最终导致β细胞死亡或功能障碍。该假设还解释了在肥胖症和2型糖尿病患者中，β细胞增加体重的能力方面，亚洲人和白种人之间的种族差异。下面的减肥正好符合若的“脂毒性”的背景下讨论的工作量假说和功能障碍β细胞，而不是死亡[对糖尿病和胰岛β细胞功能的回归缓解最近的报告10，158]。限制热量摄入不仅可以减轻β细胞遇到的长期营养负担，还可以消除刺激物，从而产生过量的循环胰岛素。这在触发细胞过程中至关重要，该过程有利于能量的利用而不是通过脂肪生成基因的下调和肝脂质代谢的正常化来进行存储。进一步研究以了解减肥后β细胞恢复的确切机制对于持续缓解T2DM至关重要。9.研究胰腺和脂质介导的β细胞功能异常的新方向在正常生理条件下，棕榈酸能刺激β-细胞分泌在胰岛素[ 61，62，209 ]。然而，长期β细胞暴露于这种刺激作用会引起应力，这是脂肪毒性或β细胞功能障碍[的触发器23，59 ]。慢性刺激β细胞可能会通过改变肝脂蛋白代谢和脂肪组织生物学而间接导致β细胞功能障碍和CVD的发展。因此，健康的β细胞功能对于预防T2DM和维持正常的心血管健康至关重要[ 7]。从长远来看，目前增加胰岛素分泌的药物疗法（例如磺酰脲类）可能对β细胞有害。未来的治疗方法应以消除脂毒性环境为目标，从而支持β细胞恢复正常功能。在诊断为T2DM时，大多数β细胞（60–70％）已经丧失功能。虽然这一过程需要近十年，目前尚没有方法来T2DM现有的开发过程中的非侵入性评估胰腺的进行性恶化上升的血糖水平[的105，210 ]。我们的工作表明，β细胞和胰腺体积下降不全者与糖尿病病程[高水平的胰腺内脂肪和增加相关26，155。合理地推测，T2DM中胰腺形态异常是由引起β细胞功能异常（“脂毒性”）的相同机制驱动的，而肝DNL可能是引发因素[ 43]。]。DNL途径可以在T2DM进展期间的早期进行调节。尽管它已经被广泛接受，但用于解释β细胞功能异常的“脂毒性”假说尚未得到证实，特别是在人体研究中[ 57 ]。需要进一步的研究以鉴定潜在的毒性脂质种类或组合，并确定它们如何精确地诱导细胞功能障碍。进入人体胰腺组织至关重要，尤其是在利用先进的成像技术时[ 211]]。精确切割的胰腺切片上的先进成像质谱（IMS）技术对于胰岛附近胰组织内脂质种类的原位定位非常有用。在这方面，时间-飞行二次离子质谱（TOF-SIMS）系统可以在亚细胞分辨率[获得脂质物种的完整的个人资料很有用212，213 ]。它可用于确定脂肪细胞内部以及单个β细胞或腺泡细胞内脂质滴中脂质的化学结构。MALDI（TOF / TOF）成像也可用于脂质结合蛋白受体（CD36）的共定位[ 214]。IMS数据可通过高分辨率电子和共聚焦显微镜成像确认。流式细胞术成像，metabolimetry，和活细胞成像是互补技术，也可能是有用的[ 215，216，217 ]。另外，沿袭追踪研究可能会为鉴定胰腺组织内β细胞，α细胞和脂肪细胞的起源提供启发[ 218 ]。脂肪组织的过度扩张改变了脂肪细胞的生物学特性，降低了其脂肪因子的分泌能力。这种不健康的状况将激活促炎性巨噬细胞，后者会产生包括肿瘤坏死因子α（TNFα）和白介素6（IL-6）在内的炎性细胞因子[ 219]。可以检测出脂肪组织炎症早期迹象的非侵入性成像技术可用于评估脂肪储存的能力，将其作为发展T2DM和CVD的危险因素。此外，了解脂肪组织扩张的分子基础对于建模其功能至关重要。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是脂肪细胞成熟的转录调节子并介导这些细胞因子和胰岛素分泌[调节的功能的要素220，221 ]。发现脂环素5（PLIN5）是脂肪细胞的另一种转录调节因子，它以cAMP依赖性方式调节人和小鼠胰岛中的胰岛素分泌，并防止对β细胞的脂毒性损伤[ 222，223 ]。胰岛素过多分泌可能通过改变肝脂蛋白代谢并促进脂肪组织的不健康扩张而间接导致β细胞功能障碍并最终发展为CVD。需要人类和动物研究的结合，以了解脂质种类对β细胞功能的毒性以及上述转录因子对脂质代谢和β细胞存活的作用。最终，这可能会引领新策略的发展（图4），以预防和缓解T2DM（目前的钝器减肥方法除外）。需要通过开发新的体内成像技术来早期监测胰腺健康。此外，有毒脂质种类的定位对于通过开发先进的离体成像方法在细胞和亚细胞水平上了解潜在的机制至关重要。此外，在T2DM的发展过程中对脂蛋白和脂质相关部分的潜在氧化翻译后修饰的鉴定将为将来的先进靶向治疗打开新的窗口。图4. 开发用于治疗2型糖尿病的新疗法的新研究方向。T2DM：2型糖尿病；GDF-15：生长分化因子15；FGF-21：成纤维细胞生长因子21；C-myc：细胞性骨髓瘤病致癌基因；β细胞：β细胞；CD36：簇分化36；DNL：新生脂肪形成；ApoB：载脂蛋白B；ApoE：载脂蛋白E；ApoC-III：载脂蛋白C-III；LP（a）：脂蛋白（a）；VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯；PPARγ：过氧化物酶体增殖物激活受体-γ；PLIN5：周磷脂5。10.结论胰腺是肝脂质的关键调节剂，健康的胰腺功能对于调节全身代谢至关重要。腺泡细胞量的减少和β细胞功能的丧失是与T2DM中胰腺内脂肪过多相关的两个主要病理过程。因此，早期的非侵入性诊断方法可用于维持胰腺健康，预防T2DM和相关的心血管并发症。“脂毒性”的经典定义不应该局限于脂肪酸的有害作用。它应该扩展到包括其他脂质种类的作用，包括与脂质相关的标志物和信号分子。尽管间接证明了T2DM中β细胞功能具有脂毒性作用，但仍需要更多工作来鉴定潜在毒性脂质物种的性质和功能。先进的原位成像在亚细胞分辨率下鉴定和共定位脂质物种将是无价的。通过使用中和抗体或配体可以减少或调节细胞对这些有毒产物的摄取，这将为开发新的治疗策略提供参考。例如，减轻T2DM的新治疗策略应集中在减肥后受到调控的关键病理生理途径上。有效的策略应首先减少过量的胰岛素并改变脂毒性环境。使用胰岛素分泌增强药物会增加剩余β细胞的代谢负担，可能导致不可逆的损害。值得注意的是，应将肝脂蛋白输出途径作为目标，以确保多余卡路里的安全储存。这可以通过饮食或药物手段，通过靶向关键调控元素（即DNL，ApoC-III，LPL）来实现。遗传，细胞和转化研究以及先进的体内成像和质谱技术将在未来增加我们对脂肪组织不健康扩张和β细胞功能障碍背后机制的了解。应该利用它来设计新颖的策略，以促进脂肪从异位部位转移出来并减少细胞对有毒脂质的暴露。在这方面，FGF-21在调节过量甘油三酸酯的摄取和脂肪组织的选择性扩张方面具有很大的作用，并且可能潜在地导致有吸引力的治疗选择。参考部分因文字数量限制无展示，可至原网站进搜索行查阅点击：查看更多医学文章 查看更多生物学文章 试用免费文章翻译功能 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    2021-02-26 19:00:23
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  • 2型糖尿病患者的研究和新治疗策略的新方向
    经过：艾哈迈德·阿尔·布拉比（Ahmad Al-Mrabeh）英国纽卡斯尔，纽卡斯尔NE2 4HH，磁共振中心，转化中心和临床研究所，医学科学学院学术编辑：Istvan Kovanecz生物医药 2021，9（2），226;收到：2020年12月31日/修订：2021年2月9日/接受：2021年2月17日/发布：2021年2月23日（本文属于《糖尿病并发症》：从病理生理学到新型治疗方法） <a href="https://www.mdpi.com/biomedicines/biomedicines-09-00226/article_deploy/html/images/biomedicines-09-00226-g001.png" title=" 图1 在2型糖尿病患者中，肝脏极低密度脂蛋白甘油三酸酯（VLDL-TG）出口与胰内脂肪之间相互作用的示意性假想图。 胰腺功能是通过内分泌和外分泌区室之间的协同作用来实现的。 脂质代谢异常是影响整个胰腺结构和功能的代谢事件的驱动因素。 每个彩色三角形的范围代表该参数的功能程度（灰色表示功能丧失）。 脂质驱动的变化可能导致2型糖尿病（T2DM）β细胞功能异常和腺泡细胞质量下降，这可能与肝脏VLDL-TG的输出和胰腺内脂肪的增加有关。 β细胞：Beta细胞； VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯； FGF-21：成纤维细胞生长因子21； NEFA：非酯化脂肪酸； BCAAs：支链氨基酸； GDF-15：生长分化因子-15； GLP-1：胰高血糖素样肽-1 ；C-myc ：细胞性骨髓瘤病致癌基因； IFG-1：胰岛素样生长因子-1 ； DNL：新生脂肪形成； ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III； SAT：皮下脂肪组织； 增值税：内脏脂肪组织。 Beta细胞； VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯； FGF-21：成纤维细胞生长因子21； NEFA：非酯化脂肪酸； BCAAs：支链氨基酸； GDF-15：生长分化因子-15； GLP-1：胰高血糖素样肽-1 ；C-myc ：细胞性骨髓瘤病致癌基因； IFG-1：胰岛素样生长因子-1 ； DNL：新生脂肪形成； ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III； SAT：皮下脂肪组织； 增值税：内脏脂肪组织。 Beta细胞； VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯； FGF-21：成纤维细胞生长因子21； NEFA：非酯化脂肪酸； BCAAs：支链氨基酸； GDF-15：生长分化因子-15； GLP-1：胰高血糖素样肽-1 ；C-myc ：细胞性骨髓瘤病致癌基因； IFG-1：胰岛素样生长因子-1 ； DNL：新生脂肪形成； ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III； SAT：皮下脂肪组织； 增值税：内脏脂肪组织。 italic> 1 ;C-myc ：细胞性骨髓瘤病致癌基因； IFG-1：胰岛素样生长因子-1 ； DNL：新生脂肪形成； ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III； SAT：皮下脂肪组织； 增值税：内脏脂肪组织。 italic> 1 ;C-myc ：细胞性骨髓瘤病致癌基因； IFG-1：胰岛素样生长因子-1 ； DNL：新生脂肪形成； ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III； SAT：皮下脂肪组织； 增值税：内脏脂肪组织。 "><a href="https://www.mdpi.com/biomedicines/biomedicines-09-00226/article_deploy/html/images/biomedicines-09-00226-g002.png" title=" 图2 在2型糖尿病缓解和复发过程中脂质参数和β细胞功能的变化。 空腹血糖（A ），空腹血浆胰岛素（B ），肝脂肪（C ），肝VLDL1-TG产生的基线变化（D ），空腹血浆VLDL1-TG（E ），血浆总甘油三酸酯（TGs）（F ），胰内脂肪（G ）和5个月时的β细胞功能（H ）（响应者n = 38；复发者n = 13） ，12个月（n = 28 /n < / italic> = 13）和24个月（n = 20 /n = 13）。 响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。 虚线是y 值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 italic> n = 20 /n = 13）。 响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。 虚线是y 值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 italic> n = 20 /n = 13）。 响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。 虚线是y 值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。 虚线是y 值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。 虚线是y 值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 显示了基线和每个时间点之间的配对数据。 数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p ＆lt; 0.05，**p ＆lt; 0.01，***p ＆lt; 0.001。 该图具有权限[43 ]。 "><a href="https://www.mdpi.com/biomedicines/biomedicines-09-00226/article_deploy/html/images/biomedicines-09-00226-g003.png" title=" 图3 2型糖尿病缓解2年后胰腺形态和β细胞功能恢复。 代表响应者（A ）的胰腺形态，胰脏体积（B ），分形维数（C ）和表面的表面渲染图像在基线，5个月，12个月和24个月时，与非糖尿病对照组相比，应答者的最大胰岛素分泌（D ）。 水平虚线表示非糖尿病对照的水平。 与每个时间点的基线配对的数据表示为胰腺体积和分形维数的平均值（SD），以及胰岛素分泌的中位数（IQR）。 *响应者与非糖尿病比较者组。 †响应者vs基线。 该图经《柳叶刀》杂志糖尿病和内分泌学[172 ]允许。 "><a href="https://www.mdpi.com/biomedicines/biomedicines-09-00226/article_deploy/html/images/biomedicines-09-00226-g004.png" title=" 图4 用于开发治疗2型糖尿病的新疗法的新研究方向。 T2DM：2型糖尿病； GDF-15：生长分化因子15； FGF-21：成纤维细胞生长因子21； C-myc：细胞性骨髓瘤病致癌基因； β细胞：β细胞； CD36：簇分化36； DNL：新生脂肪形成； ApoB：载脂蛋白B； ApoE：载脂蛋白E； ApoC-III：载脂蛋白C-III； LP（a）：脂蛋白（a）； VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯； PPARγ：过氧化物酶体增殖物激活受体-γ； PLIN5：周磷脂5。 ">摘要：心血管疾病（CVD）仍然是2型糖尿病（T2DM）患者的主要问题，而血脂异常是这两种代谢疾病的主要驱动因素之一。在这篇综述中，在肝脂质代谢异常和心血管健康的背景下，讨论了T2DM中β细胞功能障碍和恢复的主要病理生理和分子机制。（i）在正常健康中，胰腺持续暴露于营养刺激下会增加对β细胞的需求。从长远来看，这不仅会给β细胞造成压力并降低其胰岛素分泌能力，而且还会减弱对胰岛素的细胞反应。（ii）在糖尿病前期，β细胞通过胰岛素的过度分泌来补偿胰岛素抵抗。这增加了压力β细胞的代谢负担，并改变了肝脂蛋白的代谢和脂肪组织的功能。（iii）如果不清除这种具有脂毒性的高胰岛素环境，则β细胞开始失去功能，并且由于较低的脂蛋白清除率，CVD风险会增加。（iv）一旦开发出来，T2DM可以通过减肥来逆转，这一过程最近被称为缓解。然而，卡路里限制导致脂蛋白代谢正常化并恢复β细胞功能的精确机制尚未完全建立。了解缓解期间β细胞衰竭和恢复的病理生理和分子基础对于减轻β细胞负担和功能丧失至关重要。这篇综述的目的是强调脂蛋白输出和T2DM中脂质驱动的β细胞功能障碍之间的联系，以及这与心血管健康的关系。第二个目的是了解减肥后β细胞恢复的机制，并探索新的研究领域，以开发出更有针对性的未来疗法来预防T2DM和相关的CVD事件。 关键词：2型糖尿病；脂蛋白代谢；β细胞功能障碍；脂毒性；脂肪组织；减肥；糖尿病缓解；心血管疾病；新疗法1.简介2型糖尿病（T2DM）已成为全球关注的问题。它影响到世界人口的4.25亿，并加倍在未来的几十年[预测1，2]。西方国家平均有10-15％的国家卫生预算用于管理T2DM及其并发症，包括心血管疾病（CVD），这是全球主要的死亡原因[3]。然而，现有的药物在控制这一流行病相对无效，且有迫切需要其他手段来管理T2DM和防止心血管疾病[发展4，5，6]。对于患有T2DM的人和科学家们来说，仍然困扰着的主要问题之一是：“即使我不像没有糖尿病的朋友那么重，我为什么也要开发T2DM？” 有许多因素影响该疾病的病理生理，包括体重，脂肪量，年龄，种族，性别，遗传因素和环境因素[7]。但是，这些因素中的大多数是可以改变的，并且在很大程度上由生活方式干预（包括饮食和体育锻炼）控制。虽然它被认为是一个危险因素，肥胖本身并不致病T2DM [的8，9]。众所周知，大多数超重人群不会患上T2DM [10]。这种“代谢健康”表型是通过以更高的皮下相关的等位基因遗传决定的，并降低异位脂肪沉积[11，12]。另一方面，正常体重的人可能由于皮下脂肪储存能力有限，并伴有胰腺内的胰岛素产生细胞（β细胞）对这些不良代谢状况的敏感性而患上了T2DM，而个人脂肪阈值的概念解释了这种现象[9]。皮下脂肪组织代谢允许良好耐受的脂肪储存，并且这可以部分解释为什么有些人在正常体重指数开发T2DM（BMI）[9，10]。事实上，妇女通常对T2DM和心血管事件较不敏感，并且在妇女大皮下脂肪面积可以提供过量的甘油三酯保护β细胞和其他易感组织免受过量脂质[的有害影响的存储安全区7，13，14]。对胰岛素或生存的不利的代谢条件β细胞的能力高需求期间相关于增加质量和功能的β细胞的能力的遗传因素应考虑[15，16]。动物研究工作支持的皮下脂肪和β细胞的易感性的遗传基础的有益效果，以增加的葡萄糖水平和脂肪酸在肥胖和2型糖尿病[17，18]。在脂肪营养不良的小鼠模型（A-ZIP / F-1）中，皮下脂肪的移植使肝脏脂肪水平恢复到正常并调节了血糖水平[19]。此外，对来自祖克糖尿病脂肪（ZDF）大鼠模型的分离胰岛的预融合研究表明，脂肪酸和葡萄糖的同时预融合在纯合大鼠中引起β细胞功能障碍，而在杂合同窝动物中则没有[18]。全基因组关联研究（GWAS）也强调了皮下脂肪在肥胖和2型糖尿病中的保护作用[12]。迄今为止，大多数在T2DM鉴定多态性的都涉及到β细胞分泌功能，而不是胰岛素函数本身[20，21]。但是，应该认识到，当前的研究确定了不到10％的遗传因素有望导致T2DM的病理生理，并且预计将来会发现更多的遗传基因座[15]。基于从糖尿病缓解期临床试验（直接）最近的证据的基础上，减肥治疗2型糖尿病，目前纳入英国国民保健系统（NHS），从而降低心血管疾病的风险[4，5]。然而，实现和维持体重减轻是困难的，并且需要强有力的动力和长期支持以坚持饮食条件并防止体重减轻。此外，这种方法并不适合所有人，包括那些体重正常的人。迫切需要开发更具针对性的T2DM缓解策略，而无需大量减轻体重。“脂毒性”是最广泛接受的假设来解释的β细胞功能障碍的基本机制在T2DM之一[16，22，23，24]。正常脂质体内平衡的维持是通过体内许多器官（包括肝脏，胰腺和脂肪组织）之间的串扰实现的。图1是可能与T2DM中胰腺功能有关的脂质相关因子的示意性假设表示。这篇综述概述并讨论了血脂异常和心血管健康的背景下T2DM中β细胞功能障碍和恢复的主要病理生理和分子机制。此外，它将突出显示新的领域，以供将来研究开发针对T2DM的新颖疗法。是否可以在早期阶段阻止脂蛋白递送的这些有毒脂肪酸和脂质中间体的β细胞摄取，以保护β细胞并最大化其存活率，这需要进行研究。图1. 2型糖尿病患者肝脏极低密度脂蛋白甘油三酸酯（VLDL-TG）出口与胰内脂肪相互作用的示意图。胰腺功能是通过内分泌和外分泌区室之间的协同作用来实现的。脂质代谢异常是影响整个胰腺结构和功能的代谢事件的驱动因素。每个彩色三角形的范围代表该参数的功能程度（灰色表示功能丧失）。脂质驱动的变化可能导致2型糖尿病（T2DM）β细胞功能异常和腺泡细胞质量下降，这可能与肝脏VLDL-TG的输出和胰腺内脂肪的增加有关。β细胞：Beta细胞；VLDL-TG：极低密度脂蛋白甘油三酸酯；FGF-21：成纤维细胞生长因子21；NEFA：非酯化脂肪酸；BCAAs：支链氨基酸；GDF-15：生长分化因子-15；GLP-1：胰高血糖素样肽1 ; C-myc：细胞性骨髓瘤病致癌基因；IFG-1：胰岛素样生长因子-1；DNL：新生脂肪形成；ApoE：载脂蛋白E，ApoC-III：载脂蛋白C-III；SAT：皮下脂肪组织；增值税：内脏脂肪组织。 2. T2DM的脂质代谢和病因改变过量的热量摄入和异位脂肪沉积是T2DM的病理生理学[主要决定因素25，26，27，28 ]。肥胖本身，定义为固定切断的身体质量指数的（BMI），是不致病因素[8，9]，和超重的人患有糖尿病释放可具有与安全脂肪储存并[a“代谢健康”表型12，29]。另一方面，那些在较低BMI时患T2DM的人可能具有（i）有限的储存能力或紊乱的脂肪组织功能，（ii）对有毒脂质代谢产物的敏感性不同，以及（iii）在脂肪过程中未能适当增加β细胞的质量组织扩张和对胰岛素的需求增加[ 15，29，30 ]。在T2DM，脂质代谢异常，直接关系到极低密度脂蛋白（VLDL）由肝脏[生产过剩31，32，33 ]。这是通过转录因子激活脂肪生成基因，包括碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP基因）和固醇调节元件结合蛋白1C（SREBP1c），这是由葡萄糖和胰岛素，分别激活[表达加速34，35 ]。因此，肝脂肪酸从头合成（DNL）的发生率在T2DM大幅度上升下血糖和胰岛素[水平升高34，36，37]。肝功能对于通过脂蛋白中脂肪的输出（VLDL-TG）以及从循环中吸收游离脂肪酸的摄取来调节脂类代谢至关重要[31]。然而，这种机制在T2DM [障31，32]。由于肝脏无法维持脂肪吸收和输送之间的平衡，因此当皮下贮库无法容纳更多的甘油三酸酯时，多余的脂肪将被异位储存。因此，非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是常见的，并且直接参与T2DM [发病机制38，39，40，41]。过多的脂肪不仅会损害肝脏调节血糖水平的功能，还会溢出到其他异位部位，包括胰腺和肌肉，从而干扰β细胞功能和细胞胰岛素信号传导。使用磁共振成像（MRI）和脂肪乳输注技术，我们已经报道的肝脂肪和肝VLDL-TG生产T2DM主要增加升高的水平，并认为这是糖尿病的缓解后归一化[ 26，27，42 ]（图2）。如果DNL是肝脂肪过多积聚和肝VLDL-TG产生的驱动因素，则有望在T2DM缓解期间减少，这可能是未来预防和缓解计划的目标。图2. 2型糖尿病缓解和复发期间脂质参数和β细胞功能的变化。从基线的变化在空腹血糖（甲），空腹血浆胰岛素（乙），肝脏脂肪（Ç），肝VLDL1-TG生产（d），空腹VLDL1-TG（É），总血浆甘油三酯（TGS）（˚F），5个月时的胰腺内脂肪（G）和β细胞功能（H）（应答者n = 38；复发者n= 13），12个月（分别为n= 28 /n= 13）和24个月（n= 20 /n= 13）。响应者以黑色实线表示，重复器以虚线表示。虚线是y值= 0时的网格线。显示了基线和每个时间点之间的配对数据。数据以平均值±SEM表示，除了第一阶段胰岛素（IQ范围的中位数）与复发者5个月的比较：*p&lt;0.05，**p&lt;0.01，***p&lt;0.001。该图已获得许可[43]。 肝脏的另一重要功能是摄取和清除血液中的脂蛋白残留物，这是由富含甘油三酸酯的脂蛋白分解代谢产生的。这包括从循环中去除乳糜微粒残留物，中等密度脂蛋白颗粒（IDL）和高度动脉粥样硬化的低密度脂蛋白颗粒（LDL）。该过程由肝细胞上的某些受体介导，并受几种载脂蛋白（包括apoB，apoE和ApoC-III）的功能控制。因此，肝功能是CVD的主要决定因素。的重量损失如何逆转脂肪肝和实现的基本机制糖尿病的缓解在很大程度上仍然不清楚[ 10，27，43]。从啮齿类动物的研究最近数据肝蛋白质的ε同种型的激活突出显示的二酰基甘油（DAG）的作用激酶C（PKCε），这损害胰岛素的功能，并且报告重量损失来逆转该过程[ 44，45，46 ]。另外，长链的饱和脂肪酸也有报道激活Toll样受体4（TLR-4）和产生有毒的神经酰胺抑制胰岛素信号[ 46，47，48 ]。胰岛素是脂质代谢的主要调节剂。已知通过抑制激素敏感性脂肪酶（HSL）的功能来抑制脂解以维持非酯化脂肪酸（NEFA）的水平[ 49 ]。胰岛素通过下调ApoC-III和微粒体甘油三酸酯转移蛋白（MTP）的转录间接地调节肝VLDL的产生[ 50 ]。它也是转录因子叉头框蛋白（FoxO1的），其除了糖异生的调节上调载脂蛋白C-III和MTP的表达的调节剂，并由此由肝脏[增强脂化和VLDL分泌51，5]。小鼠β细胞中ApoC-III的表达受损胰岛素分泌[ 53]，而FoxO1表达保护β细胞免受不良代谢条件的影响[54]。此外，原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型（PCSK9）可能对T2DM的脂质代谢和β细胞功能有影响，并且使用抗PCSK9单克隆抗体可能在将来预防新发糖尿病。目前缺乏[55]。T2DM中的β细胞功能异常是毒性脂质的结果还是与β细胞自身或其他器官产生的其他效应蛋白有关仍是一个悬而未决的问题，这是目前研究的一个活跃领域。肥胖和T2DM中已知缺氧和氧化应激[ 56]。这种新的氧化还原环境可能是改变脂蛋白代谢和反应性脂质种类生成的起始因素，继而改变了脂肪组织的功能和β细胞的生物学特性，以在这些脂毒性条件下生存。因此，在糖尿病的发展和缓解期间对脂蛋白和相关脂质产品的生化变化的研究可能会为新的治疗目标指明道路。在这方面，使用先进的质谱技术进行的蛋白质组学和代谢组学研究将揭示脂蛋白和脂质相关分子的生物化学和功能的潜在变化。 3.脂质毒性和β细胞功能障碍β细胞功能的丧失是T2DM发病机理的关键因素。尽管对术语的争论，“脂毒性”仍然是最被广泛接受的假说来解释β细胞功能障碍的2型糖尿病[16，23，24，57]。本文旨在对脂质对胰腺和β细胞功能的不良影响的证据进行综述，但未详细涵盖“脂毒性”或“糖毒性”。有关更详细的信息，最近的其它评论覆盖细胞和分子水平[话题16，23，24，58，59，60]。在正常生理条件下，脂肪酸是已知的，从胰β细胞[刺激胰岛素分泌61，62]。因此，饱和脂肪酸是现代饮食的主要组成部分，可能是基础胰岛素过多的诱因。反过来，这允许包括胰岛素抵抗，NAFLD和血脂异常在内的一系列主要代谢异常[59]。各种假说解释在T2DMβ细胞功能的糖脂毒性效应已经假定，包括细胞凋亡，内质网（ER）应激，氧化应激，炎症，线粒体功能障碍，自体吞噬和去分化[16，22，23，63，64]。然而，如何毒性脂质可诱导应力和β细胞的功能障碍，最终的精确机制仍然极为重要要建立[7，22]。关于“脂毒性”的大多数可用数据基于对β细胞系或分离的胰岛的体外研究，并且大多数证实了棕榈酸酯在与高浓度β细胞孵育时对ER应激或细胞凋亡的有害作用[65，66]。与任一油酸（C18：1）组合：β细胞与棕榈酸（0 C16）一起温育或花生四烯酸（C20：4）防止了诱导单独棕榈酸[所述细胞损伤65，67，68]。在另一方面，孵育β细胞与花生四烯酸增强β细胞增殖和在培养的细胞系和β细胞[胰岛素分泌增加67，68]。重要的是要考虑到所有这些体外研究都使用了生理条件下不会遇到的高浓度脂肪酸，因此，尚无具体的体内证据证明所提议的脂肪酸对人的脂毒性作用[57]。在生理条件下，β细胞会暴露于包括葡萄糖，脂肪酸和氨基酸在内的多种营养物质的混合物中，因此Prentki等人最近提出了“营养压力”一词。比“脂毒性”或“糖脂毒性”更合适[23]。据报道，脂肪酸基于脂肪酰基链中的碳数和饱和度而导致β细胞功能障碍。饱和脂肪酸与长链（即，C16：0棕榈酸）已经报道了诱导细胞死亡或细胞凋亡，而不饱和脂肪酸（即，C18：1油酸）也相反的作用[59，60，68，69]。在支撑这些细胞的研究结果的，它已经证明，棕榈酸诱导ER应力是由硬脂酰基-CoA去饱和酶和ELOVL6的表达在啮齿动物中调制的[70，71]。在β细胞脂毒性体内工作在30年前被率先由Roger H. Unger的在啮齿类动物中[18，72]。在ZDF大鼠中，胰岛的甘油三酸酯含量在T2DM发生期间，高血糖发生发生前几周增加了10倍，并且与循环脂肪酸密切相关。另外，胰岛脂肪的这种增加与缺乏葡萄糖刺激的胰岛素分泌和β细胞的GLUT-2的低表达有关[18]。使用相同的模型，发现在年长的动物中输注脂质和葡萄糖会降低β细胞功能，而在年幼的动物中则不会[73]]。但是，重要的是要考虑脂质体内主要含有不饱和脂肪酸，据报道该不饱和脂肪酸对β细胞没有毒性作用。的脂肪酸脂毒性作用的证据是在人类不太显著，虽然有关于血糖的2型糖尿病的协同作用和脂肪酸对β细胞功能障碍[总协议23，57，74]。细胞在葡萄糖和脂肪酸代谢之间切换的“代谢僵硬性”是众所周知的[75]，这得到了我们最近的间接量热数据的支持，该数据显示脂质氧化的减少伴随着T2DM缓解后葡萄糖氧化的增加[27]。它最近报道，棕榈酸不是在啮齿类动物中[有效燃料β细胞76，77]，这可能部分解释了T2DM中的β细胞功能异常。一些观察和脂质输液研究报告NEFA和人类的胰岛β细胞功能之间的关联，而其他没有发现这样的证据[23，57，78，79，80]。有趣的是，使用正电子发射断层扫描（PET），研究人员发现，与正常体重对照组相比，肥胖个体中胰腺摄取的脂肪酸更高，这与葡萄糖摄取和血流量降低有关，与β标记物负相关-细胞功能[81]。要认识到的NEFA区域一级是胰岛素的严密控制之下是很重要的，而这通常是由脂肪组织胰腺[肝脏之间的串扰，以及调节49，82]。另外，循环NEFA只能使胰腺遇到的一部分脂肪酸发生，血液中NEFA的浓度很低[83]。β细胞摄取脂肪酸还有其他几种来源。（I）脂蛋白脂肪酶（LPL）以及因此从循环甘油三酸酯中摄取可以调节β细胞功能[84]。（II）脂肪细胞浸润在靠近在T2DM胰岛和甘油三酯含量的水解是对β细胞[脂肪酸的其它来源65，85]。（III）在T2DM中发现了β细胞内脂质滴的形成[86]，并且以高脂肪饮食喂养小鼠后，β细胞中HSL的高表达降低了胰岛素分泌，这与甘油三酸酯的积累较低有关与野生型小鼠相比，转基因小鼠的胰岛内[87]。此外，毒性脂质中间体从脂肪酸包括二酰基和神经酰胺酸代谢被证实造成损害胰岛素信号的肝细胞和心肌细胞内[衍生88，89]，但较少有人知道这种毒性代谢物如何影响β细胞[7，57]。因此，血浆NEFA与β细胞功能障碍之间缺乏相关性，并未提供针对脂质对β细胞功能的脂毒性作用的证据。早先的研究声称，细胞凋亡可在T2DM [解释在β细胞量和功能丧失64，90，91，92]。但是，无论从动物或人类研究[以支持β细胞死亡没有有力的证据23，30，93]。在另一方面，专业β细胞表型（去分化）的损失可通过糖脂毒性[说明63，94，95，96，97]，这是最可能的机制后解释β细胞功能的返回T2DM [缓解10，98]。下的多余的脂肪和最终葡萄糖代谢的条件下，一些β细胞失去它们的身份成为胰高血糖素产生α-细胞[96，99]。决定性的数据证实β细胞去分化是有限的，特别是在人类中[63，96]。需要更多的工作来确认去分化/再分化是否是T2DM中β细胞功能障碍和恢复的主要潜在分子机制。4.脂蛋白输出与β细胞功能障碍之间的联系是否有明确证据表明脂蛋白输出与β细胞的“脂毒性”或功能障碍之间存在联系？“双周期”假说假设肝脂蛋白输出是将多余的脂肪输送到胰腺并最终导致β细胞功能障碍的上游途径[28]。然而，到目前为止，尚无直接证据支持VLDL-TG出口是胰腺内脂肪堆积的来源这一观点，这仍然是一个假设（图1）。间接地，我们已经表明，糖尿病的缓解与肝脏VLDL-TG的输出下降有关，而回到糖尿病状态与血浆VLDL-TG的水平升高有关[43]。由β细胞VLDL颗粒的直接摄取报道在人类，并且在小鼠和受影响胰岛素分泌[发现β细胞内LPL的表达84，100]。与表达LDL受体的小鼠相比，从缺乏LDL受体的小鼠中分离出的胰岛显示出更低的LDL摄取和更高的存活率[101]。此外，据报道，LPL在胰岛的毛细血管中表达，这确保了餐后脂肪酸从乳糜微粒向β细胞的转运[83]。胰腺胰岛内ApoC-III的局部表达已导致小鼠β细胞衰竭[53]。相比之下，发现高密度脂蛋白（HDL）在β细胞中的表达对内质网应激具有保护作用[102]。在靠近高胰内脂肪含量和脂肪细胞浸润的胰岛在T2DM [是已知的65，103]。最近，我们已经证明肝脏脂肪含量和肝VLD-TG出口的正常化与VLDL-TG的棕榈酸成分的下降有关，VLDL-TG是将脂肪输送到包括胰腺在内的周围组织的途径[43]。这种脂肪酸是DNL的强制性产物，是高浓度和长时间暴露于β细胞的毒性最高的脂肪酸[69]。有趣的是，发现糖尿病复发期间β细胞功能的丧失与VLDL-TG血浆水平升高，富含棕榈酸的血浆水平升高以及胰内脂肪水平升高相关（图2）。尽管有证据表明有毒脂质在NAFLD发病机理中的作用，但关于对人β细胞的这种作用的数据有限[57]。这主要是由于接近人类胰腺组织的机会有限。与肝脏不同，胰腺活检是一个非常侵入性的过程，在临床实践中不可行。人类的可用数据来源于在手术过程中从死后捐献的器官和切除的组织中收集的胰腺样本，这不是理想的条件，可能部分解释了相互矛盾的报道[104]。由于这些障碍，迫切需要开发非侵入性成像技术来研究体内β细胞，并且目前正在开发使用安全示踪剂的新型PET-MRI方法[105]。人们已经知道了很长时间的是胰岛的生物学和结构在人和啮齿动物不同，这反映在β细胞的适应不良代谢条件[能力106，107，108 ]。因此，最近的工作应集中在人类研究上，考虑物种之间的这些主要差异。来自人类胰岛的最新RNA测序数据表明，饱和脂肪酸诱导的β细胞应激独立于主要的炎症途径[109]。最近的一项研究报告说，簇分化36（CD36）受体的更高表达与肥胖捐赠者患有T2DM的β细胞中胰岛素分泌缺陷有关[110]。CD36是一种转运蛋白，可决定β细胞对脂肪酸的摄取，并且可能是阻断这些有毒脂质产物对β细胞摄取的潜在靶标。此外，发现该CD36受体位于人β细胞的胰岛素颗粒上，并可以控制脂肪酸对胰岛素分泌的刺激[111]。需要进一步的工作来鉴定潜在的毒性脂质种类及其对β细胞功能的毒性作用的潜在机制，从而为T2DM的替代治疗提供依据。5.脂肪因子和脂质相关标记肝脏，胰腺和脂肪组织之间的高度协调可维持人类的脂质稳态。尽管人们长期以来一直认为它是储藏库，但是在发现瘦素和脂联素之后，近年来脂肪组织的代谢功能引起了更多关注[112]。因此，在讨论β细胞功能障碍，T2DM和CVD时应考虑脂肪组织的功能。瘦素主要由脂肪细胞产生，血浆水平反映了人体总脂肪量。因此，瘦素水平在女性中总是高于男性在任何给定BMI [113，114]。瘦素调节脂肪储存以及食欲和已经与两个葡萄糖和降脂作用相关[18，19，20]。脂连蛋白，脂肪细胞的另一来源的激素，具有抗糖尿病作用[21，22]。与瘦素相反，脂联素水平与肥胖呈负相关[23]。的血浆瘦蛋白与脂联素比率被认为atherogenicity在T2DM [标记115，116]。已知的是，瘦素水平在肥胖和2型糖尿病，和耐升高的瘦素作用已被广泛接受[117，118]。膳食重量损失已经报道了在瘦素原因减少和增加在脂连蛋白水平[119，120，121，122]。脂肪组织中的炎症很可能是多余脂肪堆积的结果。但是，炎症细胞因子在脂肪组织生物学中的作用尚不确定。是否炎性细胞因子促进β细胞功能障碍和心血管疾病的发展需要进一步调查，这超出了本审查[的范围123，124 ]。的低度炎症被认为与相关联的C16：0神经酰胺，以及此脂质种类的降低血浆水平被报告为对于T2DM的电位疗法[125，126]。然而，发现饱和脂肪酸诱导β细胞独立的主要炎症途径[的ER应激30，31]。点击：查看文章剩下部分 查看更多医学文章 查看更多生物学文章 使用专业文章翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于：mdpi
    2021-02-26 18:35:50
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  • 科学家开始建立我们星球的高精度数字孪生
    苏黎世联邦理工学院 Simone Ulmer地球的数字孪生系统将以高分辨率对地球系统进行全面模拟，并作为例如指导适应气候变化措施的基础。信用：ESA我们星球的数字孪生子将在未来模拟地球系统。它旨在支持决策者采取适当措施，为极端事件做更好的准备。欧洲科学家和苏黎世联邦理工学院计算机科学家撰写的新战略文件显示了如何实现这一目标。为了在2050年之前实现气候中和，欧盟启动了两个雄心勃勃的计划：绿色交易和DigitalStrategy。作为其成功实施的关键组成部分，气候科学家和计算机科学家发起了“目的地地球”倡议，该倡议将于2021年中期开始，预计持续长达十年。在此期间，将创建一个高度精确的地球数字模型，即地球的数字孪生模型，以尽可能准确地绘制气候发展和极端事件的时空图。观测数据将被不断地整合到数字孪生中，以使数字地球模型更准确地用于监视演化并预测可能的未来轨迹。但是除了常规用于天气和气候模拟的观测数据外，研究人员还希望将有关人类活动的新数据整合到模型中。新的地球系统模型实际上将尽可能真实地表示地球表面上的所有过程，包括人类对水，食物和能源管理的影响以及物理地球系统中的过程。决策信息系统地球的数字孪生系统旨在成为一个信息系统，该系统可以开发和测试场景，这些场景可以显示出更多的可持续发展，从而更好地为政策提供信息。彼得·鲍尔（Peter Bauer）说：“例如，如果您打算在荷兰规划一个两米高的堤防，我可以浏览我的数字双胞胎中的数据，并检查堤防是否有可能仍能抵御2050年的预期极端事件。”是欧洲中距离天气预报中心（ECMWF）的研究副主任，也是目的地地球的共同发起人。数字孪生还将用于淡水和粮食供应或风电场和太阳能发电厂的战略规划。目的地地球背后的驱动力是ECMWF，欧洲航天局（ESA）和欧洲气象卫星开发组织（EUMETSAT）。鲍尔与其他科学家一起推动着地球数字孪生的气候科学和气象方面的发展，但他们也依靠苏黎世联邦理工学院和瑞士国家超级计算中心（CSCS）的计算机科学家的专业知识，即ETH教授Torsten Hoefler ，来自高性能计算系统研究所，以及CSCS主任Thomas Schulthess。为了在数字革命中迈出重要一步，鲍尔强调了将地球科学与计算机科学相结合的必要性。在最近的《自然计算科学》杂志上，来自地球和计算机科学领域的研究人员团队讨论了他们希望采用哪些具体措施来推进“地球系统科学的数字革命”，他们在其中看到了挑战以及可能的解决方案能够被找到的。天气和气候模型为基础在他们的论文中，研究人员回顾了自1940年代以来天气模型的稳定发展，这是一个悄悄发生的成功故事。可以说，气象学家开创了在世界上最大的计算机上对物理过程进行模拟的过程。作为物理学家和计算机科学家，CSCS的Schulthess坚信，当今的天气和气候模型非常适合为更多的科学学科确定如何有效使用超级计算机的全新方式。过去，天气和气候建模使用不同的方法来模拟地球系统。尽管气候模型代表了非常广泛的物理过程集，但它们通常会忽略小规模的过程，但是，这对于更精确的天气预报至关重要，而天气预报又将重点放在更少的过程上。数字孪生将把这两个领域融合在一起，并能够进行高分辨率模拟，描绘整个地球系统的复杂过程。但是，为了实现这一点，必须将仿真程序的代码适配于有望大大提高计算能力的新技术。利用当今可用的计算机和算法，很难以计划的一公里的极高分辨率执行高度复杂的仿真，因为数十年来，从计算机科学的角度来看，代码开发一直处于停滞状态。气候研究得益于能够通过新一代处理器获得更高性能而不必从根本上改变其程序的方法。每一代新处理器的这种免费性能提升大约在10年前就已停止。结果，当今的程序通常只能利用常规处理器（CPU）峰值性能的5％。为了实现必要的改进，作者强调了协同设计的需要，即同时进行并同时开发硬件和算法，正如CSCS在过去十年中成功展示的那样。他们建议特别注意通用数据结构，要计算的网格的优化空间离散化和时间步长的优化。科学家们还建议将用于解决科学问题的代码与在相应系统体系结构上最佳执行计算的代码分开。这种更灵活的程序结构将允许更快，更有效地切换到未来的体系结构。从人工智能中获利作者还看到了人工智能（AI）的巨大潜力。例如，它可用于数据同化或观察数据处理，模型中不确定物理过程的表示以及数据压缩。因此，AI可以加快仿真速度并从大量数据中筛选出最重要的信息。此外，研究人员认为，使用机器学习不仅可以使计算效率更高，而且可以帮助更准确地描述物理过程。科学家将他们的策略文件视为通往地球数字双胞胎的起点。在当今可用的计算机体系结构以及不久的将来预期的计算机体系结构中，基于图形处理单元（GPU）的超级计算机似乎是最有前途的选择。研究人员估计，要全面运行数字孪生系统，将需要一个带有约20,000个GPU的系统，消耗的功率估计为20MW。出于经济和生态方面的原因，这种计算机应在有足够CO 2中性发电量的位置操作。点击：查看更多其他分类文章查看更多生物学文章使用文章翻译功能 免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。来源于：phys
    2021-02-25 16:25:56
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  • 饥饿将粘菌霉菌变成多细胞生物
    硫代谢如何为多细胞性进化铺平道路 2021年2月24日 进化生物学 微生物学（B＆M） 当煤泥霉菌Dictyostelium discoideum（简称Dicty）耗尽食物时，硫的限制会促使其从单细胞生物发展为多细胞生物。马克斯·普朗克免疫生物学和表观遗传学研究所的研究人员非常详细地介绍了这种早期真核生物中的营养信号传导途径。他们的结果表明，新陈代谢如何在多细胞性起源中起关键作用。此外，该发现还对诸如人类的更复杂生物具有治疗意义。在癌细胞中靶向硫代谢可以增强抗肿瘤免疫力。 在显微镜下，粘液霉菌Dictyostelium discoideum。饥饿诱导单细胞迪斯科菌聚集到多细胞生物中。 ©免疫生物学和表观遗传学MPI / B. Kelly 从单细胞生物到多细胞生物的转变是复杂生命形式进化的重要一步。多细胞生物起源于数亿年前，但造成这一事件的力量仍然是神秘的。为了研究多细胞性的起源，位于弗赖堡的马克斯·普朗克免疫生物学和表观遗传学研究所的埃里卡·皮尔斯（Erika Pearce）的研究小组转向了粘液霉菌 盘基网柄菌（Dictyostelium discoideum），它可以在单细胞和多细胞状态下存在，处于这一关键进化步骤的顶峰。这些截然不同的州仅取决于一件事-食物。 皮尔斯实验室的一个核心问题是回答新陈代谢的变化如何驱动细胞功能和分化。通常，他们研究免疫细胞来回答这个问题，但是，当第一作者贝丝·凯利（Beth Kelly）加入该小组时，他们决定转移注意力。“我们发现，如果我们对养分的可获得性如何引起细胞功能变化感兴趣，那么没有比Dicty更能研究的生物了，Dicty饥饿会导致细胞从自身存在变成多细胞生物。“这是生物学的巨大转变。”埃里卡·皮尔斯（Erika Pearce）说。 饥饿推动了这种社交变形虫的多细胞聚集 仅仅通过剥夺 D. discoideum 的食物供应，他们就可以将这种生物体从单细胞变成多细胞聚集体，从而使他们能够检查驱动这种多细胞性的因素。聚集体表现为复杂的多细胞有机体，单个细胞专门具有不同的功能并整体移动。多细胞迪斯科 菌 最终形成保护性孢子，使种群能够在饥饿中生存。 饥饿的 迪斯科 引起活性氧（ROS）产生的快速爆发。ROS是由我们的细胞产生的小分子，但在更复杂的基于受体的系统存在之前，也被用于进化的早期信号传导。但是，当ROS含量过高时，它们会变得有害，氧化蛋白质和核酸，最终导致细胞死亡。因此，ROS的增加通常伴随着抗氧化剂的产生以控制这些ROS。贝丝·凯利（Beth Kelly）指出：“在我们的案例中，抗氧化剂谷胱甘肽的产生增加了，以应对饥饿时大量的ROS破裂。如果我们给饥饿的粘液霉菌额外的谷胱甘肽，我们就能阻止ROS的这种增加，重要的是，停止了多细胞聚集体的形成，使细胞保持单细胞状态。” 饥饿的饮食改变他们的新陈代谢 反过来，当他们使用抑制剂阻止谷胱甘肽的产生时，他们发现与其促进更快的聚集，反而将其逆转，从而保持了单细胞状态的时间更长。这表明除了抗氧化活性外，补充谷胱甘肽的某些功能正在逆转聚集过程。他们仔细考虑了谷胱甘肽的制备方法。它仅由三种氨基酸，半胱氨酸，甘氨酸和谷氨酰胺组成。凯利将这些成分分别单独添加到饥饿的细胞中，她发现只有半胱氨酸才能在饥饿时逆转多细胞聚集。 半胱氨酸生物学的独特之处是什么？它是仅有的两个含硫的氨基酸之一，这种硫对于增殖细胞中的多种过程至关重要。它用于制造新蛋白质，对于酶活性至关重要，并支持代谢过程以产生能量。因此，限制半胱氨酸会限制硫的供应，减慢生长和扩散，并表明营养不足，无法继续进行这些过程。对于 双歧杆菌，这意味着它们应该过渡到多细胞状态，以形成可以在营养限制期生存的孢子，从而保护种群。 硫决定细胞功能和多细胞性 事实证明，硫的损失是造成这种多细胞性的重要过程，而增加的ROS是D. discoideum 实现这一目标的聪明手段 。通过增加ROS，使Dictyostelium饥饿 因此增加了谷胱甘肽的产量。“这实际上将细胞中的半胱氨酸拉成谷胱甘肽，限制了其硫用于增殖和蛋白质生产的用途。通过人为地阻止谷胱甘肽的产生，或通过向饥饿的细胞提供额外的半胱氨酸，我们可以恢复这种硫的供应，恢复增殖和单细胞状态，”贝丝·凯利说。“因此，我们揭示了硫如何决定单细胞和多细胞状态之间的转换。” 硫和氧是古代世界中常见的小元素，这项工作揭示了它们可能在多细胞起源中发挥了作用。 “除此之外，我们认为我们的工作对更复杂的生物体具有治疗意义。癌细胞具有很高的增殖能力，某些癌细胞专门保留硫的代谢。限制或靶向这些细胞中的硫代谢过程可能会增强抗肿瘤免疫力，” Pearce说。免疫细胞通过含有不同营养混合物的环境运输，免疫细胞功能取决于代谢途径的活性。操纵硫代谢可能是调节免疫细胞功能的一种手段。总的来说，在真核双歧杆菌早期检查这种保守的营养信号传导途径可能对哺乳动物细胞功能非常有用。 点击：查看更多生物学文章 查看更多医学文章 使用文章翻译功能 免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。 来源于：mpg
    2021-02-25 16:25:28
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  • 人类呼吸道病毒的广谱抑制剂-Thapsigargin
    Thapsigargin是主要人类呼吸道病毒的广谱抑制剂：冠状病毒，呼吸道合胞病毒和A型流感病毒 经过： 莎拉·贝塔吉（Sarah Al-Beltagi）克里斯蒂安·亚历山德鲁·普雷达利亚·古尔丁乔·詹姆斯Pu娟保罗·斯金纳江志敏王琳琳杨佳云阿什利C.肯尼斯·梅利兹帕维尔·格什科维奇（Pavel Gershkovich） 6，克里斯托弗·J·海斯乔纳森·阮·范·塔姆伊恩·布朗刘金华和张建洲1.诺丁汉大学动物医学与科学学院，萨顿·博宁顿，诺丁汉LE12 5RD，英国2.英国沃金GU24 0NF，Pirbright，Ash Road，Pirbright学院3.英国Addlestone KT15 3NB，Woodham Lane的Weybridge，动植物卫生局（APHA）4.中国农业大学动物医学院，农业部动物流行病学重点实验室，北京圆明园西路2号，北京1001935.英国诺丁汉萨顿博宁顿诺丁汉大学生物科学学院，LE12 5RD，英国6.英国诺丁汉大学公园诺丁汉大学药学院NG7 2RD，英国7.英国诺丁汉大学公园诺丁汉大学化学学院NG7 2RD，英国8.英国诺丁汉大学公园诺丁汉大学医学院NG7 2RD*应与之联系的作者。这些作者为这项工作做出了同等的贡献。 摘要：SARS-CoV-2和其他主要呼吸道病毒的长期控制策略除了明智使用有效疫苗外，还需要包括抗病毒药以治疗急性感染。虽然正在为大规模疫苗接种推出COVID-19疫苗，但针对任何疾病使用或开发的适量抗病毒药物证明了抗病毒开发的挑战。我们最近发现，无毒的毒胡萝卜素（TG）是肌腱蛋白/内质网（ER）Ca2 + ATPase泵的抑制剂，可诱导有效的宿主先天免疫抗病毒反应，从而阻止甲型流感病毒的复制。在这里，我们显示TG还可以在永生或原代人细胞中阻断呼吸道合胞病毒（RSV），普通感冒冠状病毒OC43，SARS-CoV-2和A型流感病毒的复制。 TG的抗病毒性能在抑制OC43和RSV方面显着优于瑞贝昔韦和利巴韦林。值得注意的是，TG在合并感染中对冠状病毒（OC43和SARS-CoV-2）和流感病毒（苏联H1N1和pdm 2009 H1N1）的抑制作用相同。酸稳定TG的感染后口服管饲法可保护小鼠免于致命的流感病毒攻击。结合其在主动感染之前或期间抑制不同病毒的能力，以及在TG暴露后至少48小时的抗病毒持续时间，我们建议TG（或其衍生物）是有希望的广谱抗SARS-CoV抑制剂-2，OC43，RSV和流感病毒。 关键字：毒胡萝卜素；抑制剂抗病毒物质; SARS-CoV-2;冠状病毒OC43；呼吸道合胞病毒;流感病毒广谱先天免疫;老鼠;瑞地昔韦利巴韦林;奥司他韦 1. 介绍在COVID-19大流行中，针对大规模疫苗接种的有效疫苗的需求从未如此大，以控制和预防可导致医院不堪重负的猖ramp的发病率，死亡率和激增的临床病例。 COVID-19是由一种新型冠状病毒引起的，该冠状病毒被称为严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2），一种包膜的阳性单链RNA病毒[1]。尽管现在正在部署COVID-19疫苗，但根除是不切实际的，并且对有效抑制SARS-CoV-2抗病毒药[2,3]的平行需求存在着并行的需求，以抑制患者体内主动病毒复制以逆转病毒进程。考虑到并不是所有的疫苗都可以在随后的感染中预防病毒的脱落，因此抗病毒药也可以用来降低人群中传播的总体病毒水平，从而减少其传播。针对任何传染病使用或开发的抗病毒药物数量很少，证明了抗病毒药物开发的实际挑战。特别是对于呼吸道病毒，通常遇到的主要障碍是病毒突变抗性的出现，这种突变抗性源于直接针对病毒特定部分的普遍采用的策略。甲型流感病毒的N1部分对病毒神经氨酸酶抑制剂奥司他韦的耐药性日益引起人们的关注[4,5]。人们对令人担忧的是对新近引入的针对病毒PA蛋白的流感抗病毒药baloxavir marboxil的耐药性不断提高[6]；甲型流感病毒的PB1基因中的突变很容易赋予对新型核苷类似物抗病毒药物favipiravir的耐药性[7]。可以潜在地规避病毒突变挑战的另一种抗病毒设计方法是，在早期感染期间调节通用的宿主固有免疫反应，以充分破坏病毒复制，从而建立获得性免疫（抗体和细胞介导的）。这种新颖的以宿主为中心的抗病毒方法可以具有抑制不同类型病毒的额外好处[8]。鉴于表现出不同病因的急性呼吸道病毒感染在临床表现上是无法区分的，因此可以同时针对不同病毒类型的广谱以宿主为中心的抗病毒药可能会大大改变临床管理。除了目前的SARS-CoV-2大流行外，甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒（RSV）仍然是造成人类呼吸道病毒感染的重要因素。流感病毒是包膜的负义分段单链RNA病毒，每年在全球范围内导致多达65万例死亡，并且是造成先前大流行的原因[9]。 RSV是一种包膜的负义单链RNA病毒，是幼儿和老年人急性下呼吸道感染的主要原因，与5岁以下儿童的院内死亡48,000–74,500相关，其中99％在发展中国家发生的死亡[10,11]。虽然在甲型流感病毒感染中使用抗病毒药可能会受到病毒抗药性的阻碍，但仅批准使用抗RSV的化学抗病毒药利巴韦林仅限于婴儿的严重感染[5,12]。我们最近显示，毒胡萝卜素（TG）是肌浆网/内质网（ER）Ca2 + ATPase泵的抑制剂[13]，在纳摩尔非细胞毒性水平上诱导了有效的宿主抗病毒应答，从而阻断了甲型流感病毒的复制[14]。TG诱导的ER应激未折叠蛋白反应（UPR）似乎是激活宿主抗病毒防御下游谱的主要驱动力。在这里，我们显示TG实际上是一种以宿主为中心的广谱抑制剂，在永生或原代人类细胞中，可有效阻断RSV，普通感冒冠状病毒OC43，SARS-CoV-2和A型流感病毒的复制。我们还确定，胃中发现的TG是低pH稳定的，从一次引发起就能够快速诱导持续至少48小时的有效抗病毒状态，并且在小鼠口服后可在小鼠体内进行治疗性保护（体内）感染，应对致命的流感病毒挑战。 2. 材料和方法2.1. 细胞和病毒原代正常人支气管上皮细胞（NHBE）和支气管上皮生长培养基由Promocell（德国海德堡）提供。在添加了10％胎牛血清（FCS）的DMEM-Glutamax中培养无限增殖的新生猪气管上皮（NPTr）细胞[15]，HEp2细胞，MRC5细胞，A549细胞，Calu-3细胞，Vero E6细胞和MDCK细胞。100 U / mL青霉素-链霉素（P/S）（Gibco，ThermoFisher Scientific，佩斯利，英国）。通过DEFRA分离出的人RSV（A2株，ATCC VR-1540），苏联H1N1（A / USSR / 77），PR8 / H1N1（A / PR8 / 1934）和pdm H1N1病毒（A / Swine / England / 1353/2009）这项研究使用了SwIV监视程序SV3401）。还使用了人冠状病毒OC43（OC43）和SARS-CoV-2病毒（2019-nCoV /意大利-INMI1株，从EVAg获得的进化枝V（008V-03893）），后者的完整序列已提交给GenBank（SARS-CoV- 2 / INMI1-Isolate / 2020 /意大利：MT066156），并且可以在GISAID网站上找到（betaCoV /意大利/ INMI1-isl / 2020：EPI_ISL_410545）。 2.2. 细胞活力测定根据制造商的说明，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定试剂盒或CellTiter-Glo 2.0细胞活力测定试剂盒（Promega，麦迪逊，威斯康星州，美国）确定细胞活力。 2.3. 细胞化学启动根据制造商的建议，将TG（美国密苏里州圣路易斯的默克公司）和瑞德昔韦（德国慕尼黑的Selleckchem公司）溶解在DMSO中，而利巴韦林和羟氯喹（默克公司）按照制造商的建议溶解在水中。化合物的抗病毒方案对细胞活力没有可检测到的不利影响。通常，除非另有说明，否则在感染前将细胞在适当的细胞培养基中稀释的所示化合物中孵育（稀释30分钟内使用），然后孵育30分钟，然后用PBS洗涤3次并用所示病毒感染（感染前启动）。或者，首先将细胞感染指定的时间，然后将化合物灌注30分钟，然后继续进行感染培养（感染后灌注）。细胞的所有TG引发仅持续30分钟，然后根据特定实验用PBS洗涤并进行下游培养。2.4. RSV感染和子代病毒定量HEp-2细胞，A549细胞和NHBE细胞根据24小时噬斑测定，在补充2％FCS的DMEM-Glutamax中以指定的RSV感染复数（MOI）感染48或72小时，收集的离心上清液用于噬菌斑测定或RT-qPCR的病毒拷贝数进行定量（请参见2.6节）。以前已经描述了通过噬斑分析对HEp2细胞进行RSV滴定[16]。简而言之，将感染细胞上清液的连续稀释液（一式三份）连续感染24小时的HEp2细胞固定在丙酮：甲醇（1：1）中，并使用小鼠抗RSV（2F7）抗体（1：1000）进行免疫染色（Abcam （英国剑桥）。2.5. 流感和冠状病毒的单一和共感染，以及子代病毒的定量甲型流感病毒感染需要无血清培养基和胰蛋白酶。 NPTr细胞和A549细胞的感染培养基是Opti-MEM I（Gibco），辅以100 U / mL P / S，2 mM谷氨酰胺和200 ng / mLL-1-甲苯磺酰胺-2-苯乙基氯甲基酮（ TPCK）胰蛋白酶（Sigma-Aldrich）。根据病灶形成试验（FFA），将特定的流感病毒MOI在感染培养基中感染细胞2到3 h，然后用PBS洗涤3次，并在新鲜感染培养基中孵育24天如图所示，持续72小时。收集纺丝上清液用于通过6 hFFA，50％组织培养物感染剂量（TCID50）或通过RT-qPCR的病毒拷贝数对子代病毒进行定量。以前已经描述了通过FFA滴定流感病毒[14]。在添加100 U/ mLP / S，2 mM谷氨酰胺和100 ng / mL TPCK胰蛋白酶的Opti-MEM I中，将A549细胞和MRC5细胞用指定的MOIOC43（基于FFA）感染OC43 3小时。用PBS洗涤3次，并在新鲜的感染培养基中孵育长达72小时。对用OC43和苏联H1N1病毒共感染的A549细胞进行了相似的处理。收集纺丝上清液用于通过FFA定量子代病毒或通过RT-qPCR定量病毒拷贝数。 在指示的MOI上，以TCID50为基础，用SARS-CoV-2将Calu-3，NHBE和Vero E6细胞感染，在补充有100U/mLP/ S，2 mM谷氨酰胺和100ng的Opti-MEMI中感染3 h。如图所示，将1mL / mL TPCK胰蛋白酶，随后在PBS中洗涤3次，并在新鲜的感染培养基中孵育总计长达72小时。对被pdm H1N1病毒和SARS-CoV-2病毒共感染的Calu-3细胞进行了相似的处理。收集纺丝上清液用于通过TCID50定量子代病毒或通过RT-qPCR定量病毒拷贝数。以96孔板形式进行TCID50滴定，以定量SARS-CoV-2和A型流感病毒，最少重复四次。在生长培养基DMEM（Gibco）中对每个样品进行十倍稀释。然后，将50µL稀释样品分别添加到MDCK和VeroE6细胞中用于流感和SARS-CoV-2滴定，并在37°C下孵育1 h。然后将培养基换成200 µL DMEM（补充200ng /mL TPCK胰蛋白酶用于流感滴定），并在37℃下孵育5天。在显微镜下评估每个孔的细胞病变作用。使用Spearman-Karber方法以TCID50计算病毒滴度[17,18]。检测限为5.62 TCID50 / mL。2.6. RNA制备和实时RT-PCRRNeasy Plus Minikit（Qiagen，希尔登，德国）用于从细胞中提取总RNA。使用Superscript III First Strand合成试剂盒（ThermoFisher Scientific）从1 µg总RNA合成cDNA。用LightCycler 96仪器（Roche，Basel，Switzerland）进行宿主基因的表达。基因表达的计算基于比较的Ct方法，已标准化为18S核糖体RNA。 HSPA5（FH1_HSPA5和RH1_HSPA5），HSP90B1（FH1_HSP90B1和RH1_HSP90B1）和DDIT3（FH1_DDIT3和RH1-DDIT3）的人ER应力引物;和人类IFNB1引物（FH1_IFNB1和RH1_IFNB1），OAS1引物（FH1_OAS1和RH1_OAS1）和RNASEL引物（FH1_RNASEL1和RH1_RNASEL1）是预先设计的Sigma-Aldrich。使用PrimerExpress 3.0.1（ThermoFisher Scientific）设计了其他引物（由Sigma-Aldrich合成），并在表1中显示。QIAamp病毒RNA试剂盒（Qiagen）用于从离心细胞培养上清液中提取病毒RNA。使用QIAGEN OneStepRT-PCR KIT进行一步实时qPCR，以定量相对病毒拷贝数。 表1.引物序列。 基因没有第一（5d – 3d）反义引物（5j–3j）18S核糖体RNA（通用）ACGGCTACCACATCCAAGGACCAATTACAGGGCCTCG-AAA F基因（RSV）CAAGAACTGACAGAGGATGGTACTGCATGTTTCAGCTTGTGGGAAGAL基因（RSV）AACACTTATCCTTCTTTGTTGGAACTTAGCAACCGAAACTCACGATAGAAAM基因（RSV）ACTCAAGAAGTGCAGTGCTAGCAAAGGACACATTAGCGCATATGGTRIG-I（人类）GAAGGCATTGACATTGCACAGTTGGTTTGGATCATTTTGATGACAM基因（苏联H1N1）AGATGAGCCTTCTAACCGAGGTCGTGCAAAAACATCTTCAA-GTCTCTGM基因（pdm H1N1）AGATGAGTCTTCTAACCGAGGTCGTGCAAAGACACTTTCCA-GTCTCTGOrf1ab（SARS-CoV-2）CCGATCATCAGCACATCTAGGTTGACAAGGCTCTCCATCT-TACCTTTOrf1ab（OC43）GCCAGGGACGTGTTGTATCCTTGATCTTCGACATTGTGACCTATG 2.7. 蛋白质印迹使用放射免疫沉淀测定（RIPA）缓冲液（圣克鲁斯，达拉斯，美国德克萨斯州）补充1％苯基甲基磺酰氟（PMSF）（圣克鲁斯），1％抑制剂混合物和1％原钒酸钠，裂解细胞，并通过Bio-RAD蛋白质测定法（Bio-Rad，Hercules，CA，USA）测量蛋白质浓度。一抗是1：500稀释的山羊抗甲型流感A1（Abcam，ab20910），小鼠抗甲型M2克隆14C2（1：1000）（Invitrogen，MA1082），山羊抗甲型流感病毒多克隆抗体以1：2000的稀释度（Abcam，ab155877），小鼠抗冠状病毒抗体OC-43株，克隆541–8F处于1：1000（Sigma-Aldrich，MAB9012）和小鼠抗β-肌动蛋白克隆AC- 74处于1：5000（Sigma-Aldrich，A2228）。合适的物种特异性二抗是过氧化物酶偶联的（Abcam），用于化学发光检测（Amersham ECL Western Blotting Detection Reagent，美国马萨诸塞州马尔伯勒）。2.8. 干扰素-β（IFNβ）ELISA通过酶联免疫吸附测定（ELISA）定量细胞培养上清液中的IFNβ分泌。 IFNβELISA（人类IFN-βQuantikine ELISA试剂盒，美国明尼苏达州明尼阿波利斯市Bio-Techne）按照制造商的说明进行。样品进行三次重复分析。2.9. 小鼠流感病毒挑战为了评估TG在感染过程中（即感染后）的抗病毒效力，并与体内奥司他韦进行比较，将6至8周龄的BALB / c小鼠（雌性）分为两组，以确定感染后存活率（每个治疗组n = 8）和子代病毒产生（每个治疗组n = 8）。小鼠经鼻内感染了3个MLD50的PR8/H1N1病毒。感染后十二小时，每天通过管饲法口服TG（1.5 µg / kg /天），奥司他韦（45 mg / kg /天）或PBS + DMSO（PBS-DMSO对照中DMSO的百分率与其他治疗相当）天。在感染后第3和5天，收集每组四只小鼠的肺以进行病毒滴定。通过TCID50分析，对接种了10倍连续稀释的均质化肺组织的MDCK细胞进行病毒滴定，并在37°C下孵育72小时。 TCID50值是根据Reed–Muench方法[19]计算的。 2.10. 量化与统计分析使用GraphPad Prism 7和图例中描述的统计方法进行统计分析。 p值&lt;0.05被认为是显着的，并表示为* p &lt;0.05，** p &lt;0.01，*** p &lt;0.001和**** p &lt;0.0001。 Kaplan–Meier方法用于生存分析。给出的结果代表了三个或更多个独立的重复，除非另有说明，否则误差线为标准偏差。2.11. 道德声明所有动物工作均已获得北京科学技术协会（ID：SYXK（Beijing）2007–0023）的批准，并按照北京实验动物管理委员会发布的《北京实验动物福利和道德规范》进行；符合中国农业大学机构动物护理和使用委员会指南（ID：SKLAB-B-2010–003）。3. 结果3.1. TG阻止子代RSV生产为了证明TG对RSV的抗病毒活性，在感染前24小时（图1A）或感染后24小时（hpi）（图1B）用TG短暂灌注人HEp2和A549细胞30分钟。每种细胞类型的感染前和感染后TG引发导致后代病毒产量显着下降（统计上显着）。感染前用0.5 µM TG引发的HEp2细胞将子代病毒的产生减少了近10,000倍（图1A）；在24 hpi时用0.5 µM TG引发的细胞将病毒输出降低约1000倍（图1B），这分别表明其对RSV的预防和治疗抗病毒潜力。用TG对HEp2和A549细胞进行30分钟的单次启动诱导了有效的抗病毒状态，这种状态持续至少48小时（图1C，D）。 TG引发HEp2细胞（感染前即刻或感染前48小时）引发了病毒L，F和M基因的转录抑制（图1E，F）。所用TG的抗病毒方案对HEp2和A549细胞无细胞毒性（图1G，H）。补充证据TG的非细胞毒性抗病毒剂量方案已在我们较早的出版物中发现[14]。因此，TG作为一种非细胞毒性抑制剂具有快速作用，可在持续至少48小时的细胞中诱导抗病毒状态，并且在主动RSV感染之前或期间使用时是有效的。 接下来，根据被感染的HEp2细胞的后代病毒产量（图2A）和病毒RNA检测（图2B），将TG的抗病毒性能与病毒唑进行比较，利巴韦林是一种被批准用于严重RSV感染的幼儿的抗病毒药物。 TG在阻止RSV复制方面优于病毒唑。例如，用0.1µM TG感染HEp2细胞预感染30分钟对子代病毒产生的抑制作用比连续使用30 µM利巴韦林（50％利巴韦林有效浓度（EC50）对RSV = 11）高160倍。 µM [20]）（图2A）。 TG在HEp2细胞的RSV抑制中表现出984的选择性指数（50％（CC50）/ EC50的细胞毒性浓度）和84.55 nM的EC90，这表明它具有很强的安全裕度（图2C，D）。在由TG引发和感染的原代NHBE细胞中，相应培养基中病毒RNA的检测降低（图2E）与病毒L，F和M基因的转录抑制（图2F）同时发生，这进一步表现为TG剂量依赖性减少病毒蛋白的产生（图2G，H）。 两者合计，TG作为抗病毒剂比利巴韦林更有效，表现出很强的选择性指数，并阻断了RSV病毒的转录和病毒蛋白的产生。在原代NHBE细胞中，相对于DMSO对照，在RSV感染之前和期间，TG依赖于TG的剂量以TG剂量依赖性的方式进行了TG的感染前致敏增强ER应激基因（DDIT3，HSPA5和HSP90B1）的表达（图3A，C）。TG还增加了NHBE细胞中RIG-I信号相关基因（RIG-I，IFNB和RNASEL）的基础表达，但是在感染过程中，相对于被感染的DMSO对照，RIG-I相关基因的诱导显着衰减（图3D，G）。因此，在NHBE细胞中RSV感染期间，RIG-I相关基因的转录诱导减少是一个特征。TG介导的RSV抑制作用。3.2. TG阻止子代冠状病毒OC43的生产为了证明TG对冠状病毒的抑制作用，在感染地方性OC43病毒之前，立即用TG引发A549细胞30分钟[21]（图4A–C）。以剂量依赖性方式，TG阻断了病毒复制，如感染细胞的培养基中病毒RNA的急剧减少（图4A），病毒转录的抑制（图4B）和病毒NP蛋白生成减少（图4C）所证明。将TG的抗病毒性能与羟氯喹（HC）进行了比较，后者是一种毒性比氯喹低的化合物，可抑制OC43[22]。 TG在阻止子代OC43病毒产生方面比HC更有效（图4D，E）。感染前引发与整个感染过程中连续使用20 µM HC相比，0.05 µM TG仅持续30分钟对OC43的抑制作用更大（针对SARS-CoV-2的HC EC50 = 4.51 µM [23]）（图4D）。与HC处理后代病毒的适度减少不同，在TG引发的感染细胞的培养基中几乎未检测到任何病毒（图4E）。在A549细胞中，TG在阻止OC43病毒（图4F）和流感病毒（图4G）复制方面比最近被批准用于SARS-CoV-2感染紧急使用的核苷类似物Remdesivir（RDV）[24]更好。 。尽管在72hpi时，细胞连续暴露于0.3 µM RDV（RDV EC50对OC43 = 0.15 µM [24]）显示约17,000倍减少子代病毒RNA的检测（相对于相应的DMSO对照）；细胞反过来，用0.3 µM TG引发的细胞则比RDV处理过的细胞具有450倍的抑制作用（图4F）。在72 hpi时，与0.3μM的RDV连续使用相比，0.05μMTG引发的细胞对苏联H1N1病毒的抑制作用还强于7倍。 RDV对流感病毒复制几乎没有抗病毒作用（图4G）。 TG在A549细胞中的抗病毒用途无细胞毒性（图4H）。 TG在MRC5细胞中OC43上的TG的选择性指数（CC50 / EC50）高，介于7072和9227之间（图4I）。总的来说，TG强烈抑制OC43病毒的转录和蛋白质产生，作为抗病毒剂比HC和RDV更有效，并且具有较高的选择性指数。 点击：查看文章剩下部分 查看更多医学文章 查看更多冠状病毒文章 使用专业文章翻译功能免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。 来源于：mdpi
    2021-02-24 16:25:36
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  • 冠状病毒，呼吸道合胞病毒和A型流感病毒的广谱抑制剂
    Thapsigargin是主要人类呼吸道病毒的广谱抑制剂：冠状病毒，呼吸道合胞病毒和A型流感病毒 点击：查看上部分内容介绍 图1. thapsigargin（TG）在无细胞毒性水平下短时间（30分钟）暴露于人细胞，迅速引起延长的（≥48h）抗病毒状态，从而阻止了RSV复制。 TG在（A）感染前24小时或（B）感染后24小时以剂量依赖性方式引发，可阻止RSV产生。 （A）用TG或对照DMSO灌注HEp2和A549 30分钟，用PBS洗涤并在RSV感染前在正常培养基中孵育24小时，或（B）首先在TG 30分钟之前用RSV感染24小时启动。 TG诱导的抗病毒状态持续至少48小时。如图所示，用TG或DMSO对照将HEp2（C）和A549（D）细胞灌注30分钟，用PBS洗涤，再进行24或48小时的正常培养；之后，细胞被RSV感染。所有细胞均以0.1 MOI感染RSV（A2株，ATCC VR-1540），共3天。收集离心的上清液感染HEp2细胞24小时，用小鼠抗RSV（2F7）抗体（pfu / mL）免疫检测RSV。2向ANOVA（Sidak的多次比较）的意义与相应的DMSO控件有关。与A549细胞相比，HEp2细胞更易于RSV复制。 TG抑制RSV转录。在RSV感染之前，立即用0.5µMTG灌注HEp2细胞（E）30分钟，在RSV感染之前（F）用TG灌注HEp2细胞30分钟，用PBS洗涤并培养48小时。总共感染3天后，提取总RNA进行cDNA转换，以量化标准化为18srRNA的病毒基因（L基因，M基因和F基因）表达。通过相对于相应DMSO对照中表达的未配对t检验确定显着性。 （G）用指定浓度的TG或DMSO对照预孵育30分钟的（Hp2和（H）A549细胞）用PBS洗涤，在无血清培养基（Opti-MEM）中培养过夜，并进行细胞活力测定（CellTiter-Glo®发光细胞活力测定试剂盒，Promega）。水平条=平均值（红色）±标准偏差；ns =不重要。与Dunnett进行多次比较的单向方差分析的意义是相对于相应的DMSO控件而言的。所有测定均一式三份，进行三次。 *p &lt;0.05和**** p &lt;0.0001。 图2. TG作为抗病毒药比利巴韦林更有效，显示出高选择性指数并阻止病毒转录和病毒蛋白产生。如前所述，在培养基中或在单独培养基中连续存在利巴韦林时，将HEp2细胞用TG，利巴韦林或DMSO对照引发30分钟，如前所述用PBS洗涤并用RSV感染（用于TG或DMSO对照）。以4 dpi收获培养基，用于（A）子代病毒滴定（pfu /mL）和（B）通过一步反转录-qPCR检测病毒L基因RNA。除非另有说明，否则单向ANOVA（Tukey的多次比较）的显着性是相对于DMSO控件而言的。在HEp2细胞的RSV感染中，TG的相应选择性指数（SI）估计为984（C，D）。在TG的感染前引发范围内，分别通过pfu / mL病毒滴定和发光细胞活力测定法确定HEp2细胞中TG对RSv的有效浓度（EC）和细胞毒性浓度（CC）。 SI = CC50 / EC50 = 63.43 / 0.06447 = 983.9。 EC90 = 84.55 nM。如图所示，用TG或DMSO对照引发NHBE细胞30分钟，用PBS洗涤并以0.1 MOI感染RSV。在48 hpi时，通过一步反转录qPCR（E）收集用于检测病毒L基因RNA的培养基，提取总RNA进行cDNA转化以定量病毒基因的表达（L基因，F -基因和M基因）标准化为18s rRNA（F）。单向ANOVA（Dunnett的多重比较）（E）和两向ANOVA（Tukey的多重比较）（F）的意义与DMSO控件有关。 TG还抑制NHBE细胞中病毒F蛋白的产生。如图所示，用TG或DMSO对照灌注细胞30分钟，用PBS洗涤，并在80℃下用RSV感染 0.05 MOI持续48小时，并直接免疫染色是否存在RSV F蛋白（G，H）。以100倍放大率拍摄的图像。随着TG启动剂量的增加，RSV阳性细胞（pfu）的数量明显减少。单向方差分析（Dunnett的多次比较）的意义与DMSO控件有关。 * p &lt;0.05，*** p &lt;0.001和**** p &lt;0.0001。 图3. NHBE细胞的TG引发增加了ER应激基因的表达（感染前和感染后）和RIG-I信号传导相关基因的基础表达，但是在感染过程中，RIG-I关联基因的诱导是衰减。用TG或DMSO对照引发细胞30分钟，用PBS洗涤并在0.05 MOI下用RSV感染48小时，然后提取总RNA进行cDNA转化以定量ER应激基因的表达（A）DDIT3，（B）HSPA5 （C）HSP90B1。将表达标准化为18s rRNA，通过2向ANOVA（Sidak的多次比较）确定的显着性相对于相应的DMSO对照。有一致的迹象表明，TG启动引发了RIG-I相关基因RIG-I（D），IFNB（E）（以及相应的IFNB蛋白（F））和RNASEL（G）的感染前激活。在16hpi对上清液进行IFNB ELISA。将所有RNA表达标准化为18s rRNA，并通过单向ANOVA和Dunnett的多重比较（D）或2向ANOVATukey的多重比较（E–G）确定的显着性相对于相应的DMSO对照。所有测定均一式三份，进行三次。*p &lt;0.05，** p &lt;0.01，*** p &lt;0.001和**** p&lt;0.0001。 图4. TG抑制OC43病毒的转录和蛋白质的产生，作为抗病毒剂比羟氯喹和瑞姆昔韦更有效，并且显示出高选择性。 （A，B）用TG引发A549细胞30分钟，用PBS洗涤两次，并在0.5MOI下用OC43感染3小时。然后，将细胞再次用PBS洗涤，并在无血清培养基（补充有0.1 µg / mL TPCK胰蛋白酶的Optii-MEM）中培养48小时，然后从（A）培养基和（B）细胞中提取RNA，分别进行反转录qPCR和cDNA转换，再进行qPCR，以检测病毒OC43复制酶多蛋白1ab RNA。 cDNA定量标准化为18s rRNA。 （C）使用重复的孔组进行细胞蛋白提取，以通过蛋白质印迹法检测OC43 NP。 （D，E）如图所示，用TG，羟氯喹（HC）或DMSO / PBS对照对MRC5细胞进行预处理，持续30分钟，用PBS洗涤两次，用OC43（0.01 MOI）感染3 h，再用PBS两次，最后在无化合物（感染前）或持续存在HC（连续）的情况下用无血清培养基补充。在2 dpi时，收集培养基用于（D）通过一步反转录qPCR检测病毒多蛋白1abRNA和（E）通过感染A549细胞24小时并免疫染色是否存在病毒NP来直接检测子代病毒。以100倍放大率拍摄的图像。所指示的显着性（通过单向方差分析确定）和病毒RNA检测的降低百分比相对于相应的对照。 （F，G）TG在阻止OC43（F）和甲型流感病毒（G方面优于伦德韦（RDV））复制。用指示的TG，0.3 µM RDV或DMSO对照对A549细胞进行初次免疫30分钟，用PBS洗涤两次，并用0.01 MOI的CoVOC43或1.0 MOI的苏联H1N1病毒感染2小时，然后再次用PBS，然后在无血清培养基中孵育TG引发的细胞，或在连续存在RDV的培养基中孵育。在24、48和72 hpi时，基于相对Ct方法，对收集的上清液进行病毒RNA提取，然后进行一步反转录qPCR，以检测OC43复制酶多蛋白1ab RNA或流感M基因RNA的相对拷贝数。 。所指示的显着性是相对于基于2通ANOVA Dunnett（F）或Tukey（G）多重比较测试的RDV处理过的细胞而言的。 （H）RDV和TG处理对细胞活力没有不利影响。将A549细胞用RDV连续处理，或用指定的TG或DMSO处理30分钟，洗涤，培养过夜，然后进行细胞活力测定（CellTiter-Glo 2.0细胞活力测定，Promega）。通过单因素方差分析相对于DMSO对照确定指示的显着性。 （I）TG对OC43的抑制作用的选择性指数（CC50 / EC50）估计在7072和9227之间。EC90= 0.02622 µM。用TG（0至91 µM）灌注MRC5细胞30分钟，用PBS洗涤两次，并在含10％FCS和1％P / S的DMEM Glutamax中培养过夜。用CellTiter-Glo 2.0细胞活力测定（Promega）进行细胞活力测定（CC50）。有效或抑制TG的剂量反应（EC50）是基于以指定浓度的TG（0至0.5 µM）灌注MRC5细胞30分钟，然后进行PBS洗涤和以0.01 MOI的OC43感染。感染后三天，收集上清液用于RNA提取和一步反转录qPCR以定量病毒RNA（多蛋白1ab RNA）的存在。 CC=细胞毒性； EC =有效浓度。 ** p &lt;0.01，*** p&lt;0.001和**** p &lt;0.0001。 接下来，评估了在OC43病毒感染之前和期间对TG启动的ER应激反应。在A549细胞中，TG以剂量依赖性方式基础上和在感染过程中刺激ER应激基因的表达。 TG诱导的A549细胞OC43感染的ER应激基因图谱（图5A，C）与NHBE细胞的RSV感染的TG应激基因图谱高度相似（图3A，C）。在A549细胞中，TG启动似乎对RIG-I相关基因（RIG-I，IFNB和OAS1）的基础转录几乎没有影响。像在NHBE细胞的RSV感染中（图3D，G）一样，在TG引发的细胞的OC43感染过程中，RIG-I相关基因的诱导也减弱了（图5D，F）。因此，在OC43感染期间降低RIG-I相关基因的转录诱导也是TG介导的OC43病毒抑制的特征。重要的是，感染前TG引发的A549细胞与OC43病毒和苏联H1N1甲型流感病毒的共同感染（图5H）一样，能够抑制单独的病毒感染（图5G）。总之，A549细胞的TG引发在基础上和OC43感染期间增加了ER应激基因的表达，在感染期间减弱了RIG-1信号相关基因的诱导，并抑制了与OC43和流感病毒的共感染。 1.1. TG阻止子代SARS-CoV-2生产 SARS-CoV-2与OC43病毒一样易受TG抑制。用TG对Calu-3和NHBE细胞进行感染前预感染可阻断SARS-CoV-2复制（图6A，C），这与在A549和MRC5细胞中用OC43病毒所见的抑制作用相当（图4A，D）。在Calu-3细胞中，用SARS-CoV-2在TG感染24小时后用TG引发感染后30分钟也有效抑制病毒，表明其在SARS-CoV-2感染中具有治疗潜力（图6B）。与流感病毒抑制一样[14]，TG无法抑制SARS-CoV-2在Vero E6细胞中的复制，这表明完整的I型IFN系统对于TG介导的宿主抗病毒应答是必需的（图6D）。 通过子代病毒RNA检测（图6E–H）和传染性子代确定，TG的广谱抗病毒效力在单独的病毒感染中与在SARS-CoV-2和pdm H1N1病毒共感染中一样明显在感染的Calu-3细胞的培养基中通过TCID50分析检测病毒（图6I–K）。在72 hpi下， 在单个病毒中，相对于相应的DMSO对照，0.5 µM TG引发的细胞相对于相应的DMSO对照，抑制SARS-CoV-2后代病毒产生300倍（99.7％）和880倍（99.9％）。 感染（图6I）和共同感染（图6J）。相对于相应的DMSO对照，在以0.5 µM TG引发的共感染细胞72 hpi时，pdmH1N1病毒的产量降低了11倍（93.3％）（图6K）。总体而言，在单病毒比较（图6E，F）和共感染（图6G，H）中，SARS-CoV-2与dd H1N1病毒感染相比，TG引发的后代病毒减少比例更高。这表明SARS-CoV -2比dm H1N1病毒对TG抑制更敏感。总之，TG是一种广谱抗病毒药物，主要针对人类主要呼吸道呼吸道合胞病毒，冠状病毒（特别是SARS-CoV-2）和甲型流感病毒，不能区分单病毒感染和复合病毒感染。 图5. A549细胞的TG引发在基础上和在OC43感染期间增加了ER应激基因的表达，在感染期间减弱了RIG-I信号相关基因的诱导，并抑制了与OC43和流感病毒的共感染。 （A–C）。TG引发似乎以剂量依赖的方式刺激内质网应激基因的表达。 （D–F）TG在感染过程中减弱了RIG-I相关基因的诱导。 A549细胞用TG引发30分钟，用PBS洗涤两次，并在0.5 MOI下用OC43感染3小时；此后，再次用PBS洗涤细胞，并在无血清培养基中培养24小时，然后收集细胞裂解液用于RNA提取和cDNA转化，用于（A）DDIT3，（B）HSPA5，（C）HSP90B1，（D ）RIG-1，（E）IFNB和（F）OAS1。将所有表达标准化为18s rRNA。意义相对于基于2向ANOVA（Tukey的多次比较）的相应DMSO控件。 （G，H）在单独的病毒感染或共同感染中，TG在A549细胞中抑制了OC43病毒和苏联H1N1病毒的复制。将细胞用TG灌注30分钟，用PBS洗涤两次，并在OC43病毒和OC43病毒和US H1N1病毒感染下 单病毒感染或共同感染3 h分别为0.01和1.5 MOI（基于FFA）；之后，将细胞再次用PBS洗涤两次，并在无血清培养基中孵育。在48 hpi收获培养基用于病毒RNA提取，然后进行一步反转录qPCR，以检测OC43复制酶多蛋白1ab RNA和苏联H1N1 M基因RNA的相对拷贝数。所示的显着性基于2次方差分析Tukey的多次比较，并且病毒RNA检测的减少百分比相对于相应的DMSO对照。所有测定均一式三份，进行三次。 * p &lt;0.05，** p &lt;0.01，*** p &lt;0.001和**** p &lt;0.0001。 图6.在单病毒感染和与pdm H1N1病毒共感染中，TG有效地阻止了子代SARS-CoV-2的产生。 （A，C，D）Calu-3和NHBE细胞的感染前TG引发，但不是Vero E6细胞，有效地抑制了子代病毒的输出。按照指示用TG灌注细胞30分钟，用PBS洗涤两次，并在80℃下感染SARS-CoV-2。 0.01MOI 3小时；之后，将细胞再次用PBS洗涤两次，并在无血清培养基中孵育，该培养基中添加了0.2 µg /mL TPCK胰蛋白酶。在72 hpi的培养基上进行病毒RNA提取。 （B）在24 hpi用TG引发阻断了SARS-CoV-2在Calu-3细胞中的复制。首先以0.01 MOI的浓度将SARS-CoV-2细胞感染细胞24小时， 然后用指示的TG灌注30分钟，用PBS洗涤3次并在无血清培养基中孵育。在48和72 hpi的培养基上进行病毒RNA提取。根据相对Ct方法，对以上分离的所有RNA进行一步反转录qPCR，以检测SARS-CoV-2复制酶多蛋白1ab RNA的相对拷贝数。用TG对Calu-3细胞进行预感染引发可抑制（E）SARS-CoV-2和（F）pdm H1N1病毒的单独感染，以及（G，H）两种病毒的共同感染。用TG或DMSO灌注细胞30分钟，用 将相应的病毒以0.01 MOI的浓度持续2 h，用PBS洗涤3次，然后在无血清培养基中孵育。在感染后指定的时间点，对感染细胞的培养基进行采样以进行病毒RNA提取，以进行一步反转录qPCR，以检测SARS-CoV-2复制酶多蛋白1ab RNA（E，G）和流感的相对拷贝数M基因RNA（F，H）。 （IK）在相似感染的培养物上于24、48和72 hpi采集的培养基样本用于检测 通过在Vero细胞中进行TCID50病毒滴定来检测存活的子代病毒（显示为平均值±SEM）。 （一）在单病毒感染中 SARS-CoV-2，TG表现出剂量依赖性病毒抑制作用。在与SARS-CoV-2和pdm H1N1病毒共感染时，TG能够同时抑制SARS-CoV-2（J）和pdm H1N1病毒（K）。所示的显着性基于2向ANOVA Tukey的多次比较测试和相对于相应DMSO对照的病毒RNA变化百分比。 * p &lt;0.05，** p&lt;0.01和**** p &lt;0.0001。 3.4. TG甲型流感病毒的翻译后阻断可在致命病毒攻击中保护小鼠 我们先前发现TG抑制NHBE细胞和NPTr细胞中流感病毒复制的过程中，病毒NP和M1蛋白的病毒转录或产量几乎没有或没有变化，表明该病毒在翻译后被阻断了[14]。由于病毒NP和M1蛋白在胞质核糖体上被翻译成核输入，因此我们在这里检查了通过ER-高尔基体运往宿主细胞膜的病毒蛋白（HA，NA和M2）[25]。来自TG引发的NPTr细胞的病毒蛋白分析（图7A，B）显示，所有其他病毒蛋白的表达似乎也未受影响，这表明TG差异性靶向了流感病毒，RSV和冠状病毒的复制周期。由于TG的抗病毒作用在酸性pH值而不是在碱性pH值下稳定（图7C，D），因此在小鼠致命流感病毒攻击中评估了TG的口服治疗（感染后）功效。组中的每只BALB / c小鼠（每组n = 8）首先经鼻内感染3种MLD50的PR8 / H1N1病毒，第二天每天一次通过管饲法给予TG或oseltamivir，持续5天。低口服剂量TG（根据经验选择1.5 µg / kg /天）所赋予的保护作用与高剂量奥司他韦（45 mg / kg /天）对小鼠的保护作用相似。在治疗上，与PBS-PBS相比，TG治疗组的存活率显着提高（图7E），感染后3天和5天（dpi）的病毒脱落减少（图7F），体重减轻程度较轻（图7G，H）。 DMSO控制。七只，八只和两只小鼠全部在TG，奥司他韦和PBS +DMSO组中存活。在所有三个参数中，用TG和奥司他韦治疗的小鼠之间没有显着差异。因此，口服TG在遭受致死性流感病毒攻击的小鼠中赋予治疗保护。 图7. TG在翻译后抑制甲型流感病毒，对酸稳定，在致命病毒攻击中具有治疗性保护小鼠的作用。 （A）由TG引发的NPTr细胞引起的流感后代产量急剧下降是（B），同时病毒蛋白没有下降。将细胞用TG灌注30分钟，用PBS洗涤两次，并以0.5 MOI的浓度感染USSR病毒2小时。之后，将细胞再次用PBS洗涤3次，并在无血清培养基中温育24小时，该培养基中添加了0.2 µgl /mL的TPCK胰蛋白酶。（A）用相应的培养基样品进行聚焦形成测定，以确定活病毒的产量（ffu / µL）。所示的显着性基于单向ANOVA（Dunnett的多重比较）和相对于相应DMSO对照的存活子代百分比。 （B）病毒蛋白，包括通过ER-高尔基体处理的蛋白（HA，NA和M2），未显示TG引发的细胞减少。（C，D）TG的抗病毒活性在酸性但不是碱性条件下是稳定的。（C）首先，将所用的TG首先按照指示在pH 1.5（在30mM盐酸中）孵育不同的时间，并用氢氧化钠中和，然后以0.5 µM的终浓度应用于细胞中30分钟。 （D）首先将所用的TG在pH12.0（10 mM氢氧化钠）中孵育2小时，并用盐酸中和，然后以0.5 µM的最终浓度将其应用于细胞30分钟。在以0.5 MOI的感染率感染苏联H1N1病毒后二十四小时，将感染的培养基用于6小时聚焦形成试验，以免疫检测病毒NP以确定子代病毒的产量（ffu/ µL）。除非另有说明，否则重要性基于单向ANOVA Tukey的多重比较，并且病毒减少的百分比与相应的DMSO控件有关。 （E–H）TG在小鼠致命流感病毒攻击中的治疗保护。组中的每只BALB / c小鼠（每组n= 8）都经鼻内感染了3种MLD50的PR8 / H1N1病毒。然后每天给每只小鼠口服一次TG（1.5 µg / kg /天），奥司他韦（45mg /kg /天）或PBS + DMSO，持续5天；第一次剂量为12 hpi。在14d内记录生存率（E），通过TCID50分析的肺病毒滴度（F）和体重变化（G，H）。每个时间点代表平均值±SEM。 Kaplan–Meier方法用于生存分析。相对于相应的TG组显示了显着性。 * p &lt;0.05，** p &lt;0.01，*** p &lt;0.001和****p&lt;0.0001。 点击：查看文章结论 查看更多冠状病毒文章 查看更多医学文章 试用免费文档翻译功能 免责声明：福昕翻译只充当翻译功能，此文内容及相关信息仅为传递更多信息之目的，仅代表作者个人观点，与本网站无关，版权归原始网站所有。仅供读者参考，并请自行核实相关内容。若需要浏览原文、下载参考文献等，请自行搜索文中提到的原文网站进行阅读。 来源于：mdpi
    2021-02-24 16:25:25
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